图第5章 真核生物mRNA的修饰概要1.ppt

mRNA Modifications in Enkaryotes —真核生物mRNA的修饰 帽子结构（The cap structure） Figure 5.1 5’断加帽 Figure 5.2 5’断加帽过程 5’断加帽过程 加帽过程三种酶: RNA三磷酸酶、鸟苷酸转移酶、甲基转移酶 第一步:在磷酸酶催化作用下，嘌呤核苷酸脱去一个磷酸。(RNA三磷酸酶从mRNA的5’端脱去一个磷酸) 第二步：脱去一个磷酸的嘌呤核苷酸在鸟苷酸转移酶作用下，加上一个倒转的磷酸鸟苷酸从而形成一个特殊的5’-5’磷酸二酯键。(由鸟苷酸转移酶加上一个倒转的鸟嘌呤核苷酸以形成一个特殊的5’—5’磷酸二脂键。) 第三步：由鸟嘌呤-7甲基转移酶催化，在G7位甲基化， 产生0型帽子（cap）(甲基转移酶在鸟苷酸核苷酸上加上一个甲基。) Figure 5.3 Figure 5.3 聚腺苷酸化（polyA）图解 在聚腺苷酸化过程中需要多种protein的参与。 对切割来说一种切割与聚腺苷酸化特异因子（CPSF）的蛋白质结合到加尾识别序列AAUAAA上，与此同时一种切割因子（CSF）结合到富含GC的下游序列上。在切割因子Ｉ和Ⅱ（CFＩ和CF Ⅱ ）的帮助下，这些蛋白质在AAUAAA上富含GC的序列之间将转录产物切断，从而为聚腺苷化产生所需要的末端。 在转录产物被切断之后， CPSF仍然结合在AUAAA位点上。 需要一种称为poly（A）聚合酶的特殊RNA聚合酶来将腺嘌呤核苷酸加上去 poly（A）尾的主要功能是保护免受m RNA核糖核酸酶的降解 Figure 5.4 显示了内含子和外显子的基因结构，形成成熟的mRNA需要进行剪切以去除内含子 Figure 5.5 5’AG/GUAUGU-----------UACUAC-YAG/3’ 其中斜线代表Intron（内含子）/exon（外显子）的交界处，这些交界处也叫剪切位点。左边界5’剪切位点和3’剪切位点。 也请注意上述序列中的一个腺嘌呤碱基被加了下划线。对它做标记是因为他在剪切机理中起着重要的作用， 在正常的剪切中，在这一核苷酸A上的-OH会“进攻”5’剪切位点。结果是在交界处外显子（exon）的G和内孩子的G之间的键受到威胁，导致内含子（Intron）中的G与来进攻的A形成新的键。 内含子（Intron）现在变成了一个环，成为套索（lariat）。5’剪切位点的外显子（exon）自由悬挂在那里，过一会儿之后外显子末端G上的-OH开始进攻3’剪切位点。这次3’剪切位点出套索和外显子（exon）之间的连接受到威胁。在5’外显子（exon）和3’外显子（exon）之间形成新的键之后，去除内含子（Intron）的整个过程就算完成了。 Figure 5.6 一个SnRNP，其中的SnRNA与pre-RNA杂交使SnRNP结合到mRNA Figure 5.7 Figure 5.7——解说III Intron splicing 剪切体在整个pre-RNA的作用是动态的。在整个过程中，不同因子与pre-RNA之间会发生互相结合和解离。First，snRNPU1结合到5’splice位点，将内含子送去splice（图5.7）。其次snRNPU2结合到具有进攻作用的腺嘌呤核苷酸上，然后，U4 和U6这两种互相结合在一起的snRNPs来到5’splice位点。同时，snRNPU5将5’和3’splice位点保持在互相靠近的位置。。在U4从U6解离之前反应是不会发生的。U4的解离活化了U6。处于活化状态的U6会从5’splice位点移去U1。最后，U6和U2才能够去执行splice过程中的主要反应，也就是使活化的腺嘌呤核苷对5’splice site和3’splice site连接在一起的反应 Figure 5.8 自我剪切(self—splicing)——四膜虫 自我剪切没有进攻性的的腺嘌呤核苷酸（A）也不形成套索结构。相反，内含子在5’剪切位点受到的威胁来自于转录产物之外的鸟嘌呤核苷酸，之后外显子的自由末端发起对3’剪切位点的攻击，替代了内含子而与后面的外显子形成的新键。以这样的方式进行剪接的内含子称为Ｉ型内含子。另外Ⅱ内含子也能发生自我剪接。 不需要任何外来因子的帮助 Figure 5.9 反式剪接 来自pre-mRNA中腺嘌呤核苷酸上的-OH能够进攻SL-RNA的5’splice-site、去除内含子部分并帮助（被剪接的前导序列）SL连接到pre-mRNA上。与正常的剪接过程相反，这一过程称为反式剪接。因为被连接到一起的RNA片段来自不同的基因 Figure 5.10 Figure 5.11 可变剪接： 根据基因剪接方式不同，抗体生产分为“与膜结合型（ a ）”和“细胞外分泌型（ b ）”