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基因工程课程设计 设计说明书 基因工程抗体的研究 起止日期： 2013 年 12 月 23 日 至 2014 年 1 月 5 日 学生姓名 ** 班级 生物技术**班 学号 ** 成绩 指导教师(签字) **学院 2013年1月3日摘 要 基因工程抗体又称重组抗体，是指利用重组和蛋白质工程技术，对抗体基因进行加工改造和重新装配，经转染到适当的受体细胞后所表达的抗体分子。基因工程抗体是继多克隆抗体和单克隆抗体之后的第三代抗体。本文扼要介绍基因工程抗体的进展情况及其分类、技术路线和临床应用。 关键词：抗体；基因工程；重组 ABSTRACT Genetic engineering antibody, anther named recombination antibody, was an expressing molecule antibody which being assemble again after it processing and transforming from antibody genetic. Genetic engineering antibody was the third generation antibody at polyclonal antibody and monoclonal antibody’s heels. The text main introduce developing about genetic engineering antibody and its sorts, technical route, clinical application. Key words: antibody; genetic engineering; recombination 目 录 一 研究背景 4 二 基因工程抗体的类型 5 2.1完整抗体 5 2.1.1嵌合抗体 5 2.1.2 改型抗体 5 2.2小分子抗体 5 2.2.1 单链抗体 6 2.2.2 双链抗体 6 2.2.3 Fab 片段 6 2.2.4单区抗体 6 2.3多价抗体 7 2.4抗体基因组文库 7 三 基因工程抗体的临床应用 7 3.1在肿瘤性疾病诊疗方面的应用 7 3.2基因工程抗体的抗感染作用 8 3.3细胞内抗体 8 3.4用于未来诊断的生物传感器和微矩阵技术 9 四 工程抗体的技术路线 9 五 小结 10 参考文献 11 一 研究背景 基因工程抗体, 即应用基因工程技术将抗体的基因重组并克隆到表达载体中, 在适当的宿主中表达并折叠成有功能的一种抗体分子。具有分子小、免疫原性低、可塑性强及成本低等优点。此技术的基本原理是，首先从杂交瘤或免疫脾细胞、外周血淋巴细胞等中提取mRNA，逆转录成cDNA，再经PCR 分别扩增出抗体的重链及轻链基因，按一定的方式将两者连接克隆到表达载体中，并在适当的细胞中表达并折叠成有功能的抗体分子, 筛选出高表达的细胞株，再用亲和层析等手段纯化抗体片段。借助于基因工程技术，既可以对完整抗体，又可以对抗体片段进行改造。抗体是“Y”字型的四肽链结构，由2 条相同的重链和2条相同的轻链借助二硫键连接而成。分析不同的免疫球蛋白的重链和轻链氨基酸序列时发现，在多肽链N 端, 占轻链的约1/2( 含107～130个氨基酸残基) 或重链的约1/4( 含107～130 个氨基酸残基) 的区域，氨基酸排列顺序随抗体特异性的不同而有所变化，称为可变区(V 区)，V 区中的高变区(HVR) 是抗体与抗原( 表位) 特异性结合的位置，因HVR 序列与抗原表位互补，故亦称互补决定区(CDR)。V 区中氨基酸组成和排列顺序变化小的部分为骨架区( FR)。V 区的3 个CDR 分别被4 个FR( 1～4) 所隔开。多肽链的C 端，占轻链的1 /2 和重链的3 /4 的区域,其氨基酸数量、种类、排列顺序及含糖量均较稳定，故称为恒定区(C 区) 。基因工程抗体主要是相对这些区域进行改造所得到。 抗体在生物医学领域中的应用极为广泛，其制备技术经历了从多克隆抗血清、单克隆抗体到基因工程抗体等3 个发展阶段。1975 年，Kohler 和Mlstein建立了体外细胞杂交融合的杂交瘤细胞，产生了仅针对某一特定抗原决定簇、纯度很高的单克隆抗体。由于单克隆抗体的高度特异性，使其在细胞生物学、基础医学、临床诊断及其他领域得到广泛应用。但同时单克隆抗体也存在一些缺陷，如完整抗体分子大，大部分抗体是鼠源性抗体，应用于人体会产生抗鼠抗体反应(HAMA) 等，因而妨碍了其在临床上的应用。为了克服大分子单克隆抗体的缺点，人们利用基因工程技术制备了人鼠杂交和完全人源化的抗体，以生产更加有效的抗体诊断及治疗制剂，越来越多地被