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第二章基本生物制药技术

第二章 生物制药工艺技术基础 Basis of biopharmaceutical technology 基因工程制药技术基础 基因工程(genetic engineering):外源DNA,通过具有复制能力的载体分子形成重组DNA分子,导入受体细胞,进行持久稳定的复制和表达,使受体细胞产生外源DNA或蛋白质。 基因工程操作过程: (1)获得目的基因; (2)构建DNA重组体; (3)将重组体导入宿主细胞; (4)工程菌的克隆与鉴定; (5)目的基因扩增与蛋白表达。 基因工程药物应用实例 治疗糖尿病的胰岛素,是一种 51 个氨基酸残基组成的蛋白质。 1982 年美国 EliLilly 公司推出基因工程制造的人胰岛素,商品名为(Humulin)。 干扰素用于治疗肝炎等病毒感染性疾病,有良好疗效。 1 升发酵液中所得的干扰素相当于过去从 1000 升人血中所得。生产成本也大为降低。 目前用基因工程生产的蛋白质药物已达数十种,许多以前原本不可能大量生产的生长因子,凝血因子等蛋白质药物,现在用基因工程办法可大量生产。 2.基因工程用于疫苗生产 常用的制备疫苗的方法,一种是减毒活疫苗,一种是灭活疫苗。两种疫苗各有自身的弱点。减毒活疫苗隐含着感染的危险性。灭活疫苗免疫活性不高,需加大注射量或多次接种。 利用基因工程制备重组DNA疫苗,可以克服上述缺点,重组DNA疫苗就是利用基因工程的方法将编码蛋白质的基因重组到载体上,再导入细胞中大量生产,表达免疫原性较强、无感染毒性的多肽制成的疫苗。 乙型肝炎基因工程疫苗就是由编码HBsAg的基因插入到酿酒酵母基因组中表达的产物。 3. 基因工程用于基因治疗 基因治疗:将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中,使外源基因制造的产物能治疗某种疾病。 复合免疫缺陷综合征 黑色素瘤 血友病 (一)动物细胞的获得 1、原代细胞:直接取自动物组织器官 2、二倍体细胞:原代细胞经过转化、筛选、克隆 3、转化细胞系:失去正常细胞特点,而获得无限增 殖能力。 蛙血细胞有多核现象,为什么? 精子和卵子结合是细胞融合吗? 是否只有近缘或同种生物能够进行细胞融合? 1958年岗田善雄用高浓度的水仙病毒和小鼠艾氏腹水瘤细胞得以融合,这一发现,打破了细胞融合只能在同种生物间进行的枷锁。 杂交瘤细胞和单克隆抗体 1975年从事免疫学研究的Kohlor和Milstein利用仙台病毒诱导经过免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,并最终获得了能分泌单一抗体的杂种细胞,该杂种细胞具有大量繁殖的能力,以及能长期分泌单克隆抗体。使免疫学领域出现了一场革命性的转机。为此两人获得1984年的诺贝尔医学奖。 一、植物组织培养 概念 科学研究表明,处于离体状态的植物活细胞,在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下,就可能表现出全能性,发育成完整的植株。人工条件下实现的这一过程,就是植物组织培养。 一、植物组织培养 植物组织培养过程 一、植物组织培养 含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的pH、适时光照等。 一、植物组织培养 植物组织培养应用举例(一) 一、植物组织培养 植物组织培养应用举例(二) 一、植物组织培养 植物组织培养应用举例(三) 二、植物体细胞杂交 (Somatic hybridization) 二、植物体细胞杂交 过程: 二、植物体细胞杂交 过程示意图 二、植物体细胞杂交 植物体细胞杂交应用 细胞工程的好处 以植物细胞全能性为基础的植物组织和细胞培养已经获得各种试管植物上千种,并可以获得有重要经济价值的药物和其他产品。 细胞器移植、体外受精、胚胎培养,为植物和家畜的品种改良提供了新的途径。 细胞融合技术,可以获得前所未有的生物为人类造福。 由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体,被称为“生物导弹”,在治疗癌症方面发挥着巨大作用。 酶工程制药技术基础 酶的特性 定义:酶是由活细胞产生的具有特殊催化功能的一类蛋白质。 催化效率高 专一性强 反应条件温和 催化活性受到调节和控制 (一)、酶工程(enzyme engineering) 酶工程是酶学和工程学相互渗透结合发展而形成一门新的技术学科。它是从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异性催化功能或者药用功效,并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。 主要包括药用酶的生产和酶法制药两方面的技术。 药用酶的生产 药用酶是指可用于预防和治疗疾病的酶。 例如:蛋白酶治疗消化不良;L-天冬酰胺酶治疗白血病;超氧化物歧化酶防护辐射损伤;溶菌酶抗菌消炎;尿激酶治疗心肌梗塞等等。

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