Plk1、Chk12在原发性肝癌组织及HepG2细胞中的表达及临床意义.pdfVIP

Plk1、Chk1/2 在原发性肝癌组织及HepG2 细胞中的表达及临床意义 摘 要 目的：研究保罗样激酶 1 （Polo- like kinase1, Plk1）、细胞周期检测点 激酶1、2 （checkpoint kinase 1/2，Chk1/2）三种在细胞周期调控过程及细胞 周期检测点机制中有重要作用的激酶在原发性肝癌组织与人肝癌细胞 HepG2 中 的表达情况，了解这三种激酶蛋白的表达与原发性肝癌之间的关系，以期为肝癌 的生物基因治疗提供理论依据。 方法：（1）使用免疫组织化学二步法（Envision 法）检测40 例原发性肝 癌组织及16例肝非肿瘤组织（正常肝组织8 例，肝硬化组织8 例）中Plk1、Chk1/2 蛋白的表达。 （2）培养后收集HepG2 细胞并提取蛋白。（3）应用BCA 蛋白浓度 测定试剂盒测定各组样品的蛋白浓度。（4）利用蛋白免疫印记（Western-bloting） 技术定性分析Plk1、Chk1/2 蛋白在HepG2 细胞中的表达情况。（5）用pHotoshop 软件测定灰度值进行定量分析，从而检验不同基因蛋白在HepG2 细胞中表达的差 异。 结果：（1）Plk1、Chk1/2 蛋白在原发性肝癌组织中表达的阳性率分别57.5%、 75.0%和 22.5%，在肝非肿瘤组织中的阳性率分别为 0%，25.0%和 56.3%；Plk1 和Chk1 蛋白在原发性肝癌组织中的表达阳性率高于肝非肿瘤组织，差异有统计 学意义(P0.05)。Chk2 在原发性肝癌组织中的表达阳性率低于肝非肿瘤组织， 差异有统计学意义(P0.05)。（2）Plk1、Chk1/2 蛋白在HepG2 细胞中均有表达。 （3）Plk1 蛋白与 Chk1/2 蛋白的相对表达量分别是：0.39±0.0226、0.08± 0.0249、0.01±0.0066，且三者之间的差异均有统计学意义，其表达的顺序依次 为Plk1Chk1Chk2。 结论：（1）Plk1、Chk1 蛋白在原发性肝癌组织中表达上调，而 Chk2 蛋白 在原发性肝癌组织中表达下调。（2）Plk1、Chk1/2 基因作为细胞周期调控中的 重要激酶在HepG2 细胞中均有表达，其表达顺序为Plk1Chk1Chk2。（3）Plk1、 Chk1 具有相对意义的肿瘤选择性表达，可能成为肝癌生物治疗中新的治疗靶点， 可以为后续生物基因治疗的开展提供支持和依据。 [关键词] Plk1 ；Chk1/2；原发性肝癌；HepG2 细胞；细胞周期 2 前 言 细胞的生长、分裂、凋亡都是在严密的细胞周期的调控下进行的。细胞周期 调控是一个精密复杂的生物学过程，而整个细胞周期是由许多细胞周期检查点及 相关蛋白质控制的。如果细胞周期紊乱，细胞的生长、分裂就会失去控制并且无 [1-2] 法按程序进入凋亡，细胞则会无限制增殖，最终形成肿瘤 。 Plk1 是一种高度保守的丝/苏氨酸蛋白激酶。Plk1 有诱导DNA 合成、DNA 完整性的检修及防止细胞凋亡的作用。Plk1 在有丝分裂中扮演关键角色，与细胞 有丝分裂期多个事件密切相关，如中心体复制，纺锤体形成，染色体分离以及胞 质分裂等。Plk1 是细胞周期检测点启动时的一个重要分子，并可通过降解细胞周 期抑制蛋白weel 使细胞重新进入细胞周期。另外，Plk1 与肿瘤的发生发展也密 切相关，国内外研究证实当 Plk1 突变或受外源性刺激干预后会失去其在有丝分 裂期的正常功能并可以诱发细胞分裂紊乱，促使细胞发生癌变。此外，Plk1 可以 通过抑制人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein, MAVS)调节具有抗病毒、抗肿瘤功能的IFN （interferon, IFN ）的生成，破坏先天 [3] 性免疫 ，降低机体对肿瘤的抵抗。 细胞周期检测点激酶1、2 （checkpoint kinase 1/2 ，Chk1/2 ）亦属于丝/苏氨 酸激酶, 是细胞周期检测中最关键的效应蛋白激酶。其主要调控细胞间期