Wnt5a信号通路介导核苷类逆转录酶抑制剂引起的神经炎症研究.pdfVIP

万方数据 本研究由 浙江省自然基金项目 “Wnt5a/CaMKII α信号通路在HIV-1 相关的 慢性疼痛发生中的作用” （LY13H090015 ） 提供资助 万方数据 浙江理工大学硕士论文 Wnt5a 信号通路介导核苷类逆转录酶抑制剂引起的神经炎症研究 摘要 核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI ）作为高效抗逆转录病毒治疗（HAART ）的一个核心组成 部分，被广泛用于抑制人类免疫缺陷病毒（HIV ）的复制和增殖。然而，长期服用NRTI 类药 物可引发神经毒性，主要表现为神经炎症和多种神经认知障碍，如阿耳茨海默氏病、帕金森 氏病和慢性疼痛等。尽管NRTI 用于治疗艾滋病已有数十年，但目前对于NRTI 引发神经炎症 的具体机制还是不甚明了。Wnt5a 是非经典Wnt 信号的主要配体之一，在组织发育和信号转 导过程中发挥重要作用。最近的研究发现，Wnt5a 参与和调控多种神经炎症反应。所以我们 推测 Wnt5a 在 NRTI 导致的神经炎症中可能起到关键性作用。本研究不仅有助于理解 NRTI 在中枢神经系统中对神经炎症发生的影响，而且将为治疗 HIV-1 相关的神经炎症提供潜在的 药物靶点。 为了探究NRTI 的治疗对中枢神经系统不同组织中炎症因子表达情况的影响，我们分别用 NRTI 类药物AZT(100 mg/kg ；sc./ days)、3TC (50 mg/kg；sc./ days)和D4T (10 mg/kg ；sc./ days) 对C57Bl/6 小鼠进行2 、5、10 和14 天的处理，并于NRTI 类药物给药结束时收集中枢神经系 统的组织。通过Western blotting 分析NRTI 处理不同时间后小鼠大脑皮层、海马和脊髓组织 中炎症因子IL-1β， TNF-α 和 IL-6 的表达水平。Western blotting 结果表明NRTI 处理后，炎 症因子在三种神经组织中都显著性增加。 我们分别使用GFAP 和CD11b 标记星形胶质细胞和小胶质细胞，进一步研究NRTI 通过 激活哪一类神经细胞来调控免疫反应。免疫染色结果表明，在中枢神经系统中NRTI 可以显著 激活星形胶质细胞，然而小胶质细胞则没有被明显激活。 确定NRTI 在中枢神经系统中引起神经炎症后，我们通过HE 染色进一步研究了NRTI 对 中枢神经系统组织病变的影响情况。组织形态学分析表明，短期使用NRTI 类药物未引起海马 和脊髓组织发生显著病变。 近期有报道发现Wnt5a 在皮层最初形成时对IL-1β 和TNF-α 具有重要的调节作用，我们 推测引起神经炎症的NRTI 诱导Wnt5a 表达。通过Western blotting 和免疫组织化学染色的方 法检测到中枢神经系统中NRTI 可明显上调Wnt5a ，初步表明NRTI 可能激活Wnt5a 。为了进 一步研究Wnt5a 对NRTI 诱导的神经炎症的作用，我们利用Wnt5a 的特异性拮抗剂BOX5 来 抑制Wnt5a 。Western blotting 结果表明，BOX5 可以显著性降低NRTI 诱导的炎症因子上调。 I 万方数据 浙江理工大学硕士论文 Wnt5a 信号通路介导核苷类逆转录酶抑制剂引起的神经炎症研究 而且，免疫组织化学染色结果表明，BOX5 显著性抑制了NRTI 对星型胶质细胞的激活作用。 综上所述，NRTI 类药物导致了神经炎症，并且是通过Wnt5a 信号通路介导的。 关键词：核苷类逆转录酶抑制剂；神经炎症；星型胶质细胞；Wnt5a