藉由定位突变改善脂肪酶的热稳定性并探讨脂肪酶应用于生产生质 .pdfVIP

1 藉由定位突變改善脂肪酶的熱穩定性並探討脂肪酶應用於生產生質 2 柴油之潛力 3 洪靖 (5109) 4 2016/ 12/21 5 大綱 6 一、前言 7 二、脂肪酶結構重塑對熱穩定性的影響：兩個單點突變的加成反應 8 三、利用定向突變改善 Bacillus licheniformis 脂肪酶的熱穩定性 9 四、含有耐熱性及有機溶劑耐受性的脂肪酶轉形入 Aspergillus oryzae 細胞作為 10 全細胞生物催化劑：探討其特性並應用於酵素生質柴油生產之潛力 11 五、結論 12 摘要 13 增加熱穩定性是提升酵素工業利用性之主要目的之一，利用定位單點突變將 14 脂肪酶 LipR3 突變成 LipR5 ，可增強其熱穩定性與活性，促使反應速率提高， 15 半衰期增加，並且對極端條件 (pH 值、有機溶劑、抑制劑)顯示出耐受性。以 16 Bacillus licheniformis 脂肪酶為例，用 error-prone PCR (eP-PCR) 反應進行兩輪定 17 向突變增加其熱穩定性、活性與有機溶性耐受性 。第一與第二輪eP-PCR的反 18 應後，篩選出 eP-231-51 和 eP-231-137 這兩株突變脂肪酶進行活性測定，其中 19 含 eP-231-51 脂肪酶之熱穩定性比原生型脂肪酶高出 13.5 倍。此外與原生型相 20 比，其催化效率提昇 30 ％。由於近年來能源短缺問題，將脂肪酶以海藻酸鈣固 21 定化提升脂肪酶熱穩定性之技術成本過高，在工業應用上會有困難，因此後續研 22 究探討使用 Aspergillus oryzae 做為全細胞生物催化劑。將高熱穩定性之 23 Geobacillus thermatenulatus 脂肪酶 BTL2 基因轉形至其中，可提升 BTL2的熱 24 穩定性、活性與有機溶劑耐受性，並使其高甲醇濃度下催化甲醇分解而不損失脂 25 肪酶活性，能夠做為生產生質柴油的最佳生物催化劑。 26 27 28 29 30 1 參考文獻 2 1. Adachi, D., Hama, S., Nakashima, K., Bogaki, T., Ogino, C., ＆ Kondo, A. (2013). 3 Production of biodiesel from plant oil hydrolysates using an Aspergillus oryzae 4 whole-cell biocatalyst highly expressing Candida antarctica lipase B. Bioresource 5 Technology 135: 410-416. 6 2. Adachi, D., Koh, F., Hama, S., Ogino, C., ＆ Kondo, A. (2013). A robust 7 whole-cell biocatalyst that introduces a thermo- and solvent-tolerant lipase into 8 Aspergillus oryzae cells: Characterization and application to enzymatic biodiesel 9 production. Enzyme a