利用差示扫描量热法优化抗体生产 - 生物通.pdfVIP

应用指南 利用差示扫描量热法优化抗体 生产 本应用指南修改自Guziewicz等（2008）2007年微量热技术当今趋势会议（E. Reese和S. Spotts，eds ），127-153页。 概述 开发用于治疗用途的蛋白质的生产过程中，存 在本应用指南中，基于Genzyme科学家的最新报告，我们 在在有许多挑战需要克服。最显而易见的是，紧 报道了利用DSC所获得的热稳定性数据来筛选抗体的病毒 迫的项目时间表和有限的初期可用的材料推动 灭活条件。这些信息在生产过程中实现了快速简单的稳 了对快速、可靠和灵敏的工艺开发工具的需要。生产步 定性分析。对于本处研究的抗体，来自DSC的表观Tm数 骤经过定期评估和优化，以改善蛋白产量，缩短生产时 据对病毒灭活后是否立即提高储存pH的推荐很关键，合 间，并提高最终的药物产品的长期稳定性。药物终产量 适的pH最终使得结构稳定性增加。本实例阐明了DSC和热 及稳定性上的任何提高对于工艺及制造经济学都极其重 力学分析在治疗蛋白开发过程中的关键作用。 要。相反，生产中任一步骤的失败，会导致产量和稳定 性下降，并最终导致经济损失。 简介 实践证明，热力学分析在协助鉴定蛋白的物理稳定性上 是一种宝贵的方法。了解那些影响稳定性的因素，比如 开发治疗用途的蛋白质的最终目标是设计出具有足够稳 pH、离子强度和辅料，对设计和优化生产过程很关键。 定性以及能承受运输、加工和储存压力的剂量形式。生 差示扫描量热法（DSC ）是一种强大的分析工具，能评 物制药开发是复杂的，需要专业知识及多个功能领域的 估这些稳定性因素。DSC在整个生物治疗剂的开发流程 投入，比如工艺开发、制造和配方开发。通常分配的时 中都能得以利用，因为它能快速轻松地简化生产过程中 间很紧迫，因此关于剂量形式的保质期的实时稳定性评 工艺条件以及储存条件的选择。DSC产生的热力学参 估是不切实际的。因此，生物分析科学家需要依靠加速 数，如熔融温度（Tm ），是快速评估蛋白稳定性所必不 和强制的降解的研究组合，来探索某一蛋白将可能遇到 可少的。 的。 潜在不稳定性。一种能协助对蛋白的溶液行为进行早期 材料与方法 评估的方法是非常宝贵的。然而，在早期评估过程中， 差示扫描量热法（DSC）：DSC是利用MicroCal高通量VP- 能够用于分析的材料的数量常常是一个限制因素。采用 Capillary-DSC （MicroCal，LLC，Northampton，MA）开 少量蛋白，并能提供结构和稳定性信息的方法是非常重 展的。除特别提及外，每种蛋白的热谱图是在25°C- 要的。这些步骤所产生的对某个蛋白质的初期热力学评 100°C以200°C/小时的扫描速率获得的。单独缓冲液的 热谱图已经在分析前利用Origin 7.0绘图软件从每种蛋白 估能够让我们进一步了解该蛋白质在多种条件下的溶液 谱图中扣减出来，此软件装由MicroCal VP-Capillary DSC 行为。此类分析的首选工具是差示扫描量热仪（DSC）。 附加分析软件配备。 尽管其他方法也能获得相关信息，但DSC具有一些关键 的优势：高通量能力（利用自动化的VP-Capillary DSC系 利用DSC优化病毒灭活持续步骤 统），重复性，几乎无限的缓冲