蓖麻遗传转化体系构建及蓖麻毒蛋白基因干扰载体转化研究.pdfVIP

Y1920853 摘 要 蓖麻作为“绿色石油，被广泛应用于化工，航空航天等多个领域，其开发 具有广泛的前景。但由于蓖麻籽中含有多种剧毒物质，如蓖麻毒蛋白、凝集素等， 极大的限制了蓖麻的综合利用。利用RN加技术，沉默蓖麻毒蛋白基因，改良蓖 麻品质，培育低毒的蓖麻品种，为蓖麻分子育种提供新的种质资源，对拓宽蓖麻 的综合利用有重要意义。 本试验建立了蓖麻遗传转化体系，采用农杆菌介导法，利用蓖麻毒蛋白A链 基因所构建的基因沉默双元表达载体，转化通蓖5号蓖麻品种，获得了抗性植株。 对所获得的植株，分别从DNA、RNA水平上进行检测，初步判断成功构建了蓖 麻遗传转化体系，转化后获得蓖麻毒蛋白A链基因被抑制的植株。主要研究结果 如下： 1在建立蓖麻高效再生体系的研究中，采用根癌农杆菌转化蓖麻子叶节，成 功地将RTA．RN～基因导入蓖麻。试验中通过蓖麻子叶节再生试验，研究了蓖麻 子叶节抗性筛选、根癌农杆菌的侵染浓度、侵染时间、共培养时间、生根培养等 因素对蓖麻遗传转化效率的影响。试验结果表明，外植体预培养2d，农杆菌浓度 抗性筛选的培养基诱导筛选培养，经过四周的抗性筛选后，获得转基因抗性植株， 将获得的抗性植株转接到生根培养基，诱导生根。经过二十天的生根培养。将带 有3～5cm的不定根的抗性苗，炼苗移栽，3个月后得到再生植株。 2采用arAB法提取蓖麻基因组DNA，进行目的基因片段PCR扩增，得到 290bp目的基因片段，与预期效果一致，将PCR扩增的特异目的片段进行纯化回 收，连接载体并转化大肠杆菌感受态，经重组质粒的筛选和鉴定，对纯化后的目 的基因片段测序。初步证实外源基因已整合到蓖麻基因组中。采用TrizoI法对蓖 麻转基因抗性植株进行RNA提取，进行l汀．PCR扩增，并没有得到任何片段，对 麻毒蛋白基因。 关键词：蓖麻；遗传转化体系：l冰～技术：农杆菌介导：RT．PCR l 0 ● _ ofGeneticTransformationof onConstruction System Study CastorandTransfo册ationofRicin Vector Disturbing Abstract Asthe oil”re∞urcctoaltemate 0nlyrcnewable“野cen oil，castorw弱widely usedin other t0a of chemicaJ，aviation，aerospacc柚dficlds．However，ducvariety toxicsubst锄cesinc弱tor limited higIlly the utilization0fc笛tor．with ofRN～tosilenccricin comp陀hcnsiVc tcclulology gcnc，