蛋白纳米脂质体制备过程中的活性保护研究.pdfVIP

捅要 为研究蛋白和多肽类药物在制剂过程中的活性变化及其机理，减少药物在制 剂过程中的活性损失，本文以胰蛋白酶为模型药物制备纳米脂质体，研究制备过 程中胰蛋白酶的活性变化，并添加四种活性保护剂保护蛋白活性，通过检测蛋白 的结构变化和分子动力学模拟过程来考察保护剂保护蛋白活性的机制。 1，采用逆向蒸发法制备胰蛋白酶纳米脂质体，粒径160nm，包封率为47％， Zeta电位．58mv；胰蛋白酶在脂质体制备过程中活性损失为原始蛋白的37％，四 种保护剂中PEG对活性的保护效果最好，可使活性保留为原始蛋白的46％，是 一种良好的保护剂。 、 2，采用圆二色谱和傅里叶红外光谱研究胰蛋白酶在制剂过程中的二级结构 V 变化，应用荧光光谱研究蛋白的三级结构变化。圆二色谱显示胰蛋白酶在纳米脂 质体制备过程中其二级结构中的Q．螺旋含量由18．7％降为13．2％，B．折叠和13． 转角含量分别由15．6％和27．0％增加到20．3％和31．9％，红外结果显示相同趋势。 荧光数据表明有机溶剂处理后蛋白荧光性增加，制备成脂质体后荧光性减小，分 子更加致密。四种保护剂的加入可以使蛋白的二级结构得到保留，其中PEG的 保护效果最佳，但对三级结构的变化影响不大。 3，采用flexX对接和amber软件对保护剂中最简单的分子精氨酸和胰蛋白酶 活性中心进行了分子对接和分子模拟，研究精氨酸与胰蛋白酶的作用机制。结果 显示精氨酸可进入到胰蛋白酶的活性腔道中，并与之可形成7对氢键，两者结合 力很强，理论上可以维持蛋白活性腔的三维结构，保护活性腔不被外界因素的影 响而发生变化。 结果表明，保护剂可能是通过防止胰蛋白酶在脂质体制备过程中的二级结构 变化，达到减少蛋白活性在制剂过程中的损失。 ．- 关键词：蛋白质，脂质体，活性保护，蛋白质结构，分子模拟 ’ ABSTRACT To the lostof and inthe studyactivity proteinpeptidedrugs na．1lO—liposome andmechani．qmof this wastokenas preparationprocess activitylost，inpaper，trypsin amodel in four WCleadded agents drug，encapsulatedllallO-liposome．Andprotective into the the in structureand preventproteinactivitylost，bydetectingchangesprotein molecular simulationsto the dynamics investigateprotectiveagentprotection mechallisrnfor proteinactivity． byreverse size 1．Preparedtiypsinhallo-liposome evaporation,particle wasl