慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚与脾胃湿热证 蛋白组学研究.pdfVIP

摘要 目的 本课题采用同位素相对标记与绝对定量技术 （isobarictagsforrelative and absolutequantitation，iTRAQ），探索慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证、脾胃湿 热证与健康正常人之间的差异表达蛋白质，寻找慢性乙型肝炎肝郁脾虚证、脾胃 湿热证的差异蛋白表达谱，初步筛选出肝郁脾虚证、脾胃湿热证的潜在生物学标 志物，为慢性乙型病毒性肝炎中医证候的本质提供现代化依据，推动该病中医证 候诊断客观化的研究。 方法 运用蛋白质组学iTRAQ技术对临床单位采集的慢性乙型肝炎肝郁脾虚证、 脾胃湿热证患者及健康正常人进行蛋白质检测，采用SPSS19.0系统、Mascot鉴 定软件进行数据分析，筛选出两种证型可能的差异表达蛋白质。 结果 1．肝郁脾虚证组和健康对照组比较，共筛选出157个差异表达蛋白（P＜ 0.05），其中112个蛋白上调，45个蛋白下调；脾胃湿热证组和健康对照组比较， 163 P 0.05 128 35 共筛选出 个差异表达蛋白（ ＜ ），其中 个蛋白上调， 个蛋白下 调。 2．肝郁脾虚证组和脾胃湿热证组比较，肝郁脾虚组共筛选出30个差异表达 蛋白（P＜0.05），22个蛋白上调，8个蛋白下调。其中，发现表达差异倍数在 1 TUBA1A 两倍以上的蛋白 个： 上调表达；脾胃湿热证组和肝郁脾虚证组比较， 脾胃湿热组共筛选出24个差异表达蛋白 （P＜0.05），22个蛋白上调，2个蛋白 下调。其中，发现表达差异倍数在两倍以上的蛋白6个：ACTA2、ACTG2、ZNF628、 DEFA1、DEFA3、CaM均上调表达。 1 万方数据 3.差异蛋白与课题组前期两证型microRNA分析均表明：酶活性调节、代谢 过程、细胞发育、细胞凋亡、炎症应答、免疫反应等功能为慢性乙型肝炎肝郁脾 虚证相关；免疫系统、细胞杀伤、细胞凋亡、刺激反应、肌动蛋白等功能可能与 慢性乙型肝炎脾胃湿热证相关。 结论 1．慢性乙型肝炎肝郁脾虚和脾胃湿热证组与健康对照组存在差异蛋白表达。 2 TUBA1A ． 可能是慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚证的潜在生物学标志物； ACTA2、ACTG2、ZNF628、DEFA1、DEFA3、CaM可能是慢性乙型病毒性肝炎 脾胃湿热证的潜在生物学标志物。 3．肝郁脾虚证和脾胃湿热证组中，差异蛋白和课题前期研究microRNA 间 存在共同的功能。 4.本研究探索性的应用蛋白组学iTRAQ技术，进一步证明了此技术在慢性 乙型肝炎中的科学性与创新性，可为今后慢性乙肝的研究提供参考依据。 关键词 乙型肝炎；肝郁脾虚证；脾胃湿热证；iTRAQ 2 万方数据 ABSTRACT Objective UseingiTRAQmethodtostudyondifferentexpressioncorrelationbetweenliver stagnation and spleen deficiency syndrome and spleen and stomach damp-heat syndromeofchronichepatitisBtofindthedifferentproteinsineachgroup,