酶工程第6章酶的结构和功能.ppt

第六章 酶的结构和功能;一、酶的活性中心;酶的活性中心示意图;酶分子中氨基酸残基的分类;接触残基：R1、R2、R6、R8、R9、R163、R164、R165 ;2．酶活性中心的拓扑学;羧肽酶A活性中心的结构;羧肽酶A活性中心的结构示意图;二、酶活性中心化学基团的鉴定;1.化学修饰法;（1） 使用非特异性试剂对特殊基团的标记;木瓜蛋白酶的非特异性试剂修饰;木瓜蛋白酶的非特异性试剂修饰;酶活性部位微环境的影响;（2）差示标记法;差示标记法;胰蛋白酶的差示标记;胰蛋白酶的差示标记;胰蛋白酶的差示标记;差示标记法的缺点;（3）亲和标记;Ks 型亲和标记物举例;Ks 型亲和标记物举例;B．Kcat 型亲和标记;Kcat 型亲和标记举例; 一个在无光时稳定的化合物可逆地结合到酶的活性中心，照光后受光解激活，产生高反应性基团，与酶的活性中心共价结合。常见的试剂是光解时给出高度易反应的碳烯的重氮化合物或硝烯的叠氮化合物。 在植物生理学研究中，用氚偶氮—IAA作光亲和标记试剂，经紫外光照射后，从番茄茎细胞质膜上分离出了IAA受体蛋白。 ;某些常用的修饰剂;鉴别化学修饰剂是否已经引入酶活性中心的标准;分析化学修饰结果时应注意的问题;2．动力学分析法;动力学分析法;各种氨基酸残基的pK值与解离热函△H;3．X-光衍射分析法;肌红蛋白的X射线衍射图;肌红蛋白分子中部分肽链的电子密度图;三、组成酶活性中心的重要化学基团;酶活性中心基团的确定;一些丝氨酸蛋白酶活性中心丝氨酸附近的肽链组成;一些半胱氨酸蛋白酶活性中心的半胱氨酸残基附近的氨基酸顺序;四、酶促化学修饰和酶活性调节;1．酶原的激活;酶原的激活;（2）酶原激活的机制;胰凝乳蛋白酶原的活化;2．共价修饰调节;一些可被磷酸化/脱磷酸调节的酶;（2）蛋白激酶;A．A激酶;A激酶活性的调节;A激酶R亚基的假底物作用; G激酶由两个亚基组成，其激活方式与A激酶不同， 2分子cGMP与酶结合后就形成活性形式。 G激酶的反应速度仅为A激酶的百分之几，故在体内可能不起重要作用。但这两种蛋白激酶在体内的分布不同，A激酶在胞浆多，G激酶在细胞核及质膜较多。;（3）磷酸化部位;酶共价修饰的意义;五、酶的空间结构与功能的关系;酶的结构与功能;RNase的重组实验;12位和119位为两个His;RNase的重组实验;RNase的重组实验;酶蛋白自动折叠;2．酶的四级结构与功能的关系;原体;别构酶的催化亚基和调节亚基;Y型六聚体 X型六聚体 纤维状多聚体 谷氨酸脱氢酶 丙氨酸脱氢酶 无活性;六、酶催化作用的机制;催化机制类型;1. 反应物的接近效应（proximity）和定向效应（orientation）;分子间反应和分子内反应;分子间催化和分子内催化;2．共价催化作用（covalent catalysis）;（1） 亲核催化作用（nucleophilic catalysis）;参与亲核催化的基团;A．亲核催化酰基转移反应;咪唑催化对－硝基苯乙酸酯水解;B．亲核催化磷酸基转移反应;C．涉及Schiff 碱的亲核催化作用;酶促亲核催化;（2）亲电催化作用（electrophilic catalysis）;醛缩酶催化醛酮缩合反应;酶的辅助因子提供亲电基团;转酮酶中硫胺素焦磷酸亲电催化转酮醇反应;3．酸碱催化作用（acid-base catalysis）;酸碱催化作用的分类;酸碱催化作用的分类;氨基酸侧链基团上的可解离基团;专一碱催化作用;广义碱催化作用;专一碱和广义碱催化作用的比较;（1）Bronsted催化作用定律;Bronsted 关系式;Bronsted 作图;（2）广义酸碱催化作用的机制;;;（3）协调的???义酸碱催化作用;四甲基葡萄糖在苯中的变旋反应;4．诱导契合（induced-fit）和底物应变（distortion）效应;底物应变示意图;非酶系统中张力对反应速度的影响;七、羧肽酶A（carboxypeptidase A）催化作用的机制;羧肽酶A催化作用的机制;羧肽酶A与底物的结合;羧肽酶A催化作用的机制;羧肽酶A催化机理之一;;;羧肽酶A催化机理之二;