采用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法对猪瘟强毒与疫苗弱毒的鉴别研究.pdfVIP

第34卷第l期 中国预防兽医学报 V01．34．No．1 2012年1月 ChineseJournalofPreventive Medicine Jan．2012 Veterinary 1 doi：10．3969／j．issn．1008—0589．2012．01．1 Green 采用SYBR I实时荧光定量RT—PCR方法 对猪瘟强毒与疫苗弱毒的鉴别研究 谢金文t，李 安啦，肖跃强-，王金良-，李峰·，沈志强-．，崔言顺2 (1．山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600；2．山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018) I荧光定量IH．PCR结合 摘要：为建立一种能够区分猪瘟病毒(csFv)强毒与弱毒疫苗C株的SYBRGreen 分析，设计一对共用下游引物以及分别针对CSFV强毒株与弱毒疫苗的特异性上游引物。其Tm值分别为84．5±0．5 ℃和88．5±0．5℃，熔解曲线分析显示为单特异峰。检测结果显示本实验建立的鉴别CSFV强毒感染与弱毒疫苗 的荧光定量RT．PCR结合熔解曲线分析方法特异性强，对其他相关病毒无特异性扩增；敏感性高，最低检出量为 5×RID。的细胞疫苗基因组拷贝；重复性好；并且扩增效率高、线性范围广、检测时间短，可对免疫猪群中 CSFV强毒感染做出快速准确的鉴别检测，为有效防制猪瘟提供依据。 关键词：猪瘟；定量检测；熔解曲线；鉴别诊断 中图分类号：$852．65 文献标识码：A 文章编号：1008—0589(2012)01．0045．04 Differentialdetectionof andC--strainvaccinevirusesof wild--type classicalswinefevervirusSYBRGreenreal·-timeRT--PCR by I XIE Jin-wenl，LIAnl”，XIAO Yuc—qian91，WANGJin—lian91，LIFen91， SHEN Yah-shun2 Zhi·qiangP，CUI BinzhouAnimal Medicine Institute，Binzhou256600，China； (I．Shandong Science＆Veterinary ofAnimal 2．College Science＆VeterinaryMedicine，ShandongAgriculturalUniversity，Tai’an271018，China) Abstract：Forestablishadifferentialdetectionof andC—strainvaccinevij-gsesofclassicalswinefever wild—type virus(CSFV)， was witha commonreverseand2 forward