标记免疫分析实验方法学进展.pdfVIP

268 Labeled ImmunoassaysClin Med。Dee．2007。Vo1．14。No．4 标记免疫分析实验方法学进展 沈丽芳 (浙江萧山医院临床医学检验中心，浙江 萧山 311201) 美国学者Yalow和Berson于1960年建立的 ng水平且量程要求三个数量级以上的实验是难以 RIA，使医学生物学检测进入了超微量分析(10 满足的。以美国ABBOTT公司Commander、德国 ～ 10 g／mL)，该技术利用抗体(Ab)作为结合剂， BM公司 ES一300、瑞士 Serono公司 SR一1、瑞士 使反应特异性大幅度地提高，在临床疾病诊断和科 Roche公司的 COBAS CORE为代表的“管式酶 研工作中应用甚为广泛。 标”采用链霉亲和素包被管和生物素化Ab，以增大 近年来，随着单克隆抗体(McAb)、基因重组、 Ab结合量，达到增加放大的效果(如 E 3()())，采 电子计算机等的发展，以酶、荧光、发光、重金属离 用 FITC连接第一抗体和通用抗 FITC磁化颗粒 子和稀土元素替代放射性核素的非放射性标记技 作B／F分离(如SR一1)，以达到增加光径的目的。 术层出不穷，包括RIA一起统称为标记免疫分析。 在显色底物上，E 3()()采用 ABTS，而 SR一1采用 随着方法学和设备的改进，放射性计数正被光的吸 了磷酸酚酞，提高了显色的稳定性，但灵敏度和重 收、或荧光发光强度的测量、电化学的度量直至免 复性均难超过RIA。 疫传感器的信号等所替代。标记物已从单一核素 2．1 酶免疫荧光分析 EIA中的底物改为荧 到应用酶、荧光剂、发光剂以及重金属离子(铬、胶体 光底物后，成为酶免疫荧光分析(EIFA)，由于荧光 金)和稀土元素(铕Eu、铽Tb、钌Ru)等。有时还将 的强度可大于激发光 10倍之多，故可有效地提高 多种方法、多种标记物用在同一测定中，例如酶标记 检测灵敏度，又由于荧光测量的范围比吸收光测量 法除用显色底物外，还可用荧光或发光剂作底物，即 范围宽，即线性范围加大(提高一个数量级)。如美 称为酶免疫荧光或免疫发光技术，现叙述如下。 国ABBOTT公司的AXSYM全自动微粒子EIFA 1 放射免疫分析 仪，采用 AP标记 Ab，底物为4一甲基磷酸伞型酮 RIA或免疫放射分析(IRMA)是以放射性核 (4-MUP)，使用的微粒子直径仅有0．5／,m且表面 素为标记物的经典的标记免疫分析法。随着单抗、 多孔，从而大大增加反应面积，提高灵敏度，缩短了 基因工程技术的发展以及各类细胞因子的发现与 反应孵育时间，且完全自动化。 提纯，RIA应用的领域更加深入。但 RIA有缺陷： 2．2 酶免疫发光分析 EIA中的底物改为发 ①放射性核素半衰期短。②反应时间过长(数小时 光底物后，便成了酶免疫发光分析(EII A)技术。 至过夜)不利于临床应用。③分析的灵敏度是 美国DPC公司开发的IMMUI ITE全自动EILA 10 g／mL或10 g／mI ，再提高有困难，并难以 分析仪以聚苯乙烯塑料珠为固相载体，以AP为标 自动化分析，制约了它的发展。 记物，以AMPPD[3-(2’。螺旋金钢烷)一4一甲氧基 2 酶免疫分析 (3”磷酰氧基)苯基一1，2二氧乙烷]为发光底物，其 酶免疫分析(EIA)是将酶促反应的专一性与