毛细管柱固定抗原流动注射化学发光免疫法测定IgG.pdfVIP

西北大学学报(自然科学畈) 2007年12月，第37卷第6期，Dec．，2007，Vo1．37，No．6 Journal of Northwest Univecsity(Natural Science Edition) · 化学与化学工程· 毛细管柱固定抗原流动注射化学发光免疫法测定lgG 李晓霞’一，李延清 ，申丽华 ，漆红兰 (1．陕西师范大学化学与材料科学学院，陕西 西安 710062；2．延安大学化学与化工学院，陕西延安 716000) 摘要：目的 建立基于毛细管柱固定抗原流动注射增强化学发光免疫法测定IgG分析的新方法。 方法 以辣根过氧化物酶(HRP)标记抗IgG与抗IgG竞争毛细管内壁表面固定的IgG抗原，利用 HRP催化对鲁米诺一过氧化氢一对碘苯酚体系的增强化学发光，建立测定IgG的流动注射化学发 光免疫分析方法。结果 在选定的实验条件下，化学发光信号与IgG在稀释比为1：l×10“ 1： 1×10m间成良好的线性关系，相关系数为0．996 0。对稀释比为1：5×10mIgG抗体连续l1次测定 的相对标准偏差为6．5％。结论 将该法应用于合成血清样品中lIgG抗体的测定，结果满意。 关 键 词：流动注射分析；免疫分析；化学发光；毛细管柱；IgG 中图分类号：0657．3 文献标识码：A 文章编号：1000-274X(2007)06-0996-04 免疫分析因其良好的选择性被广泛用于药物、 毒物和环境污染物等的分析。化学发光免疫分析因 1 实验部分 其灵敏度高、线性范围宽、设备简单而倍受关注。常 用的标记物有鲁米诺及其衍生物，辣根过氧化物酶 1．1 试 剂 等。由于化学发光的产生通常持续时间短造成检测 辣根过氧化物酶(HRP，250 U／rag)，辣根过氧 上的不便。．Whitehead等发现辣根过氧化物酶能催 化物酶标记抗IgG(华美生物工程公司)，戊二醛、3一 化对碘苯酚一鲁米诺一过氧化氢体系的化学发光， 氨丙基乙基硅烷、对碘苯酚(p—IP)、单克隆抗血清 产生的光强度大、持续时间长且发光信号稳定 』， IgG抗原 (rabbit IgG．reagent grade from serum 称为增强化学发光。增强化学发光已被广泛应用于 Lotl21K9023)，单克隆抗血清抗IgG(monoclonal an— 化学发光免疫分析中 j』。流动注射化学发光免疫 ti—rabbit IgG Lot61K4876)，牛血清蛋白(BSA)和鲁 分析将抗原或抗体固定到固相载体上作为免疫反应 米诺均购自Sigma公司；甘氨酸，上海生化试剂厂； 器和流通池，利用夹心法或竞争法对抗gt／抗原进行 0．025 mol／L鲁米诺储备液：准确称取2．215 g鲁米 测定。常用的载体有多孔玻璃、聚乙烯微球及聚偏 诺溶解于100 mL 0．10 mol／L NaOH溶液中，并用 二氟乙烯膜 等，存在响应速度慢等缺点。毛细 0．10 mol／L NaOH溶液定容于500 mL容量瓶中，避 管柱因其响应速度快、便于定量等优点 ‘，常被用 光保存。使用时用0．10 mol／L Tris—HC1缓冲溶液 于色谱和毛细管电泳分析中。将毛细管拄作为固相 (pH 9．0)逐级稀释至不同浓度。2．5％戊二醛(质 载体固定抗原或抗体的流动注射化学发光免疫分析 量比)溶液用0．10 mol／L pn 7．4磷酸盐缓冲溶液 还未见报道。本文以鲁米诺一过氧化氢一对碘苯酚 配制；封闭液】．0％BSA(用0．050 mol／，L pH 9．6碳 为发光体系，以抗IgG与辣根过氧化物酶标记的抗 酸盐缓冲溶液配制)；包被缓冲液为0．050 mol／，L IgG竞争毛细管内壁表面上固定的IgG抗原，建立 pH 9．6碳酸盐缓冲溶液；再生液为0．10 mol／L 了竞争法测定抗IgG的流动注射化学