液相色谱实用技术 色谱柱的使用和保养 色谱柱的选择 非极性或极性较小的样品可用一般的C18柱 酸碱性的化合物建议选用填料经封尾钝化过的C18柱,PH范围2-9(12) 糖类,氨基酸,有机酸,多环芳烃,GPC有专用柱 键合相色谱柱 以硅胶为基质,通过化学键合方式把碳十八、碳八、胺基等基团联在基质上作为固定相。这种固定相要占所有柱填料的60-70% 优点∶ 固定相稳定,不易流失 应用广泛,可使用多种溶剂 消除硅羟基的不良影响 缺点∶ pH值不能小于2或大于8 同样填料,各种牌号色谱柱不尽相同 反相HPLC柱(C18)的性能 常规C18填料的稳定性 硅胶基质填料 pH范围:2-8 pH值大于7时键合相粉碎或溶解 pH值小于2时键合相的化学键断裂 经常用缓冲液 固定相降解 填料新的键合技术 - PH范围 2-12 - 稳定性好,使用寿命长 良好的色谱实验习惯 拿到一根新色谱柱时,先测柱效 保留在新色谱柱上测得的色谱图,并记录条件 定期检测柱效 色谱柱的使用及操作 流动相的转换 特别是GPC柱 流速(压力)的变化幅度 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求 色谱柱的保养(一) 样品方面 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度 如样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶解度,防止其在流动相中析出 了解样品与色谱柱的基质/填料是
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