液芯波导阵列芯片检测血清及尿液中的β2-微球蛋白.pdfVIP

第35卷 分析化学(FENXI HUAXUE) 研究简报 第12期 2007年12月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1776～1778 液芯波导阵列芯片检测血清及尿液中的 2-微球蛋白 赵琰 章竹君 (陕西师范大学化学与材料科学学院，西安710062) 摘 要 提出了一种液芯波导免疫分析阵列芯片的检测系统，结合光强差技术提高了ELISA的灵敏度，HRP的 线性范围为1×10 。～9×10 。g／L，检出限为3．0×10 g／L，RSD小于1％(e=3×10 。g／L，，l=11)，线性范 围的下限与检出限均比普通的光度法下降了100倍，将其应用于血清和尿液中 -微球蛋白的免疫分析，与标准 方法所得结果相符。 关键词 液芯波导，酶联免疫， -微球蛋白 1 引 言 酶联免疫分析(ELISA)由于设备简单、廉价，已成为一种临床常规的免疫分析方法…。我国商品生产 的免疫分析药盒大多属于这种。酶联免疫使用的检测方法是光度法，由于光度法的灵敏度较低，使它在低 含量组分的测量中受到了限制。 光度法进行定量分析所依据的原理是朗伯 比尔定律，由该定律可知，要提高光度法的灵敏度有两种 途径：一是增大摩尔吸光系数，但这对ELISA方法来说，由于其使用的显色剂非常有限，已无发展空间；另 一 途径是增加光程长，普通分光光度计比色皿最长不超过5 cm，但用液芯波导，使光在吸收池内发生全反 射，可以获得很长的光程，从而极大地提高分析的灵敏度_2l3 J。赵一兵等 曾提出了一种用测量光强差代 替吸光度的方法，从理论上来看可以使灵敏度提高约1000倍，研究证明，只有当光程长大于21．7 cm( = 10。L／mol·cm)时，这一方法才能够实现。因此，使用液芯波导是实现光强差法的必要条件 J。 ／32-微球蛋白(／32-microglobin；／32MG)是人体组织相容抗原(HIA)的一个 轻链，由淋巴细胞和有 核细胞合成和分泌，测定血清或尿液中的 一MG浓度为临床肾功能测定，肾移植成活，糖尿病肾病，肾 功能不全，痛风湿，重金属镉汞中毒以及某种恶性肿瘤的临床辅助诊断提供较可靠和灵敏的指标。本实 验以测定 一MG的ELISA法作为模型，研究了这一新技术的应用。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 U-2000紫外 可见分光光度计(日本岛津公司)；970CRT荧光分光光度计(上海分析仪器总厂)；液 芯波导光度计(实验室自制，见图1)；恒流泵(TS2-60，河北保定兰格恒流泵有限公司)；微量连续可调 取液器。 底物液a：四甲基联苯胺(TMB)(华美生物工程公司)溶于无水乙醇中制备成2×10 mol／L的储 备液；底物液b：在10 mL Na HPO 一柠檬酸(上海试剂厂)缓冲液中加人20 L 3％的H 0 溶液(西安试 剂厂)；终止液：2 mol／L H SO 。所有试剂均为分析纯。实验用水均为二次蒸馏水。 2．2 实验方法 2．2．1 液芯波导阵列芯片的制作 液芯波导阵列芯片由两个PMMA单片(50 mm×40 mm×5 mm)制 作而成，如图1所示。上基片有6个内径为0．5 mm的小孑L。左边3个小孑L为测定溶液人口，右边3个 小孑L为废液出El。下片的通道由激光刻蚀而成，埋上长40 mm，内径为609 m的液芯波导管。两基片 对齐后在108~C，1．5 MPa的条件下键合10 min。最后装上三叉型玻璃光导纤维、发光二极管和3个光 2007-06-25收稿；2007-08-23接受 本文系国家自然科学基金资助项目(No E—mail：zzjl8@hotmail．com 第12期 赵琰等：敝~心-14-波导阵列芯片检测血清及尿液中的 一微球蛋白 敏二极管。 2．2．2 实验步骤 吸取20 IxL 一MG标准品、血清 样品(若尿样为80 IxL)加入微孔中，再加入200 IxL 一 MG酶标记物，轻轻摇匀，室温温育50 min；控干微 孔板中的温育液，用洗涤液洗4次(每孔加入300 )，每次洗涤都需甩净微孔中的水珠；将TMB和 图1液芯波导阵列芯片 H2O2溶液按1：1( )混匀作为底物液并向每个微 Fig·1 L