第七章核酸汇编.ppt

影响DNA Tm大小的因素： ① DNA均一性； ② G-C含量与Tm值成正比； ③ 介质中离子强度。 ① DNA均一性 均一性高，变性的温度范围越窄，据此可分析DNA的均一性 。 浓度50ug/mL时，双链 DNA A260=1.00， 完全变性（单链） A260= 1.37 当A260增加到最大值一半时， 即1.185时，对应的温度即为 Tm。DNA的Tm一般在82—95℃之间 Tm 浓度50 ug/mL时， 双链DNA A260=1.00， 完全变性（单链）A260= 1.37 当A260增加到最大增大值一半时，即1.185时，对应的温度即为Tm。 DNA的Tm一般在82—95℃之间 测定Tm，可推知G-C含量。G-C%=（Tm-69.3）×2.44 ② G-C含量与Tm值成正比 离子强度高，Tm高。 ③ 介质中离子强度 当DNA的稀盐溶液加热到80-100℃时，双螺旋结构即发生解体，两条链彼此分开，形成无规线团。 DNA变性后，它的一系列性质也随之发生变化，如紫外吸收(260 nm)值升高, 粘度降低等。 核酸的复性:变性DNA在适当的条件下（一般低于Tm 20-25℃） ，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。 DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复。 (二) 核酸的复性(renaturation) DNA复性的