中心实验室实验指南凝胶染色-中国医学科学院北京协和医院中心实验室.PDF

中心实验室实验指南 凝胶染色 作者：郭丹 修订日期：2014-9-16 【目的及应用】： 对SDS后的凝胶进行染色 【试剂及设备】： 1.试剂 考马斯亮蓝 G350, R250, H PO ，(NH ) SO ，甲醇，冰醋酸，硫代硫酸钠(5%)，醋酸钠，戊二醛溶 3 4 4 2 4 液(25%)，硝酸银溶液(2.5%) ，甲醛溶液(37%) ，NaHCO3 ，EDTA 二钠盐 2. 设备 脱色摇床 【实验步骤】： 1. 经典考染的方法及步骤 (1) 试剂的配置 1) 10×phast Gel Blue R350 储存液 200ml phast Gel Blue R350 1 片 去离子水 80ml 混合后搅拌均匀 5~10min 甲醇 120ml 充分搅拌使其溶解，0.45μM 过滤，室温下存放，即为0.2%考染储存液(10×) 2) 脱色液配置 甲醇3 300ml 600ml 900ml 1200ml 乙酸1 100ml 200ml 300ml 400ml 去离子水6 600ml 1200ml 1800ml 2400ml 编号 ：PUMCHCL-P-3-Q02-1 北京协和医院中心实验室 更新日期：2014/09/16 第1 页,共5 页 中心实验室实验指南 总体积 1L 2L 3L 4L 3) 1×考染工作液的配置(0.02%) 10×储存液：脱色液( 甲醇:乙酸:水=3:1:6) 100ml ：900ml (2)经典的考染步骤 步骤 试 剂 时间 1) 固定(此步骤为可选) 20% TCA(三氯乙酸) 1h 2) 染色 1×考染工作液(0.02%) 2h 3) 脱色 脱色液 2×30min 4) 清洗 去离子水 2×5min  凝胶可以过夜染色，具有固定和染色双重作用；  固定步骤为可选项，其优点在于能够使背景更干净；  对于结合有玻璃板的凝胶其染色脱色等均为单面，故各步骤时间应当加倍。 2. Neuhoff 胶体考染法： (1) 试剂配制 1) solution A 780ml H PO (ortho-phosphoric acid) 20ml (2%v/v) 3 4 (NH ) SO ammonium sulfate) 100g (10%w/v) 4 2 4 ( 加入去离子水至780ml 2) solution B: 20ml CBB G250 1g (0.1%w/v) 去离子水 20ml 3) solution C: solution A+ solution B= 800ml solution A 780ml solution B 20ml 将两者混匀后不能过滤，可以室温下存放。 4) solution D: 染色临用前在 800ml 的C 溶液中加入200ml 的甲醇，使其终浓度为20% (v/v) ， 总体积为1000ml 编号 ：PUMCHCL-P-3-Q02-1