云南红豆杉简并锚定微卫星2PCR反应体系优化研究 - 林业科学研究.PDF

林 业 科 学 研 究　2007, 20 ( 6) : 739～743 F ores t R esea rch 　　文章编号 : 100 11498 (2007) 云南红豆杉简并锚定微卫星 PCR 反应体系优化研究 缪迎春 , 苏建荣 , 张志钧 (中国林业科学研究院资源昆虫研究所 ,云南 昆明 650224) ( 21 ) ( 摘要 :采用交互正交设计 L64 4 对濒危植物云南红豆杉简并锚定微卫星 PCR 反应体系分别进行了 5 因素 Taq 2 + ) ( 2 + ) 酶 ;M g ; dN TP; DNA 及引物 4 水平的优化筛选 , SA S软件统计分析表明: 3 个单因素 Taq酶 ; M g ; dN TP 和 2 个 ( 2 + 2 + ) 交互作用 Taq ×M g ,M g ×dN TP 对此反应体系有显著影响作用 。云南红豆杉简并锚定微卫星 - PCR 反应的优 μ 2 + ( - 1 ) ( - 1 ) 化体系是 :在 20 L 反应体系中含有 1 ×PCR buffer, Taq酶 4 U ,M g 2. 0 mmol ·L , dN TP 0. 4 mmo l ·L , ( μ - 1 ) ( ) DNA 75 ng,引物 1. 0 mo l ·L ,退火温度 54 ℃ 。交互正交设计既能快捷有效地筛选出最佳 PCR 反应体系 , 又能揭示试验因素及其交互作用对扩增的影响程度 ,分析结果更客观 、准确 ,具有一定的应用价值 。 关键词 :云南红豆杉 ;简并锚定微卫星 - PCR;反应体系 ;交互正交设计 中图分类号 : S7 18. 4 文献标识码 : A O ptim iza tion for SSRanchored PCR Reaction Sy stem in Endangered Plan t Taxu s yu n n an en sis M IA O Ying chun, SU J ian rong, ZHAN G Z h ij un (R esearch In stitu te of R esou rce In sects, CA F, Kunm ing　6