hTERT启动子调控下CD137L表达载体的构建及其在卵巢癌细胞中的表达.pdfVIP

第45卷第12期 山 东 大 学 学 报 (医 学 版) vo1．45 No．12 2O07年12月 JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES) Dec．2O0r7 文章编号：1671—7554(21307)12—1224—05 hTERT启动子调控下CD 1 37L表达载体的构建及其 在卵巢癌细胞中的表达 张溪 ，崔保霞 ，马道新 ，孔北华 (山东大学齐鲁医院I．妇产科；2．血液病研究室，济南250012) 摘要：目的 研究hTERT启动子调控下CD137L表达载体的构建及其在人卵巢癌细胞系中的表达，探讨 CD137L靶向基因治疗的可行性。方法 采用RT-PCR法从K562细胞中克隆CD137L全长基因，将其克隆到 真核表达载体pcDNA3中，构建的质粒为pcDNA3一hCD137L，用Hind m和Xba I双酶切后将CD137L再定向插 入pBTdel一279中，构建成hTERT启动子调控下CD137L表达载体pBTdel一279一hCD137L，采用酶切法和测序法 鉴定。用Fugene6转染试剂盒将两种重组质粒分别瞬时转染人卵巢癌细胞株OVCR3和人胚肺成纤维细胞 株HELF，RT—PCR和流式细胞仪检测CD137L的表达。结果 测序证实所克隆的CD137L基因序列与GENE— BANK中的序列相符。经限制性内切酶酶切，电泳后显示片段插入正确，证实构建成功。pcDNA3一hCD137L 转染后OVCR3细胞和HELF细胞均可检测到CD137L的表达，但pBTdel一279一hCD137L转染后仅在OVCR3细 胞中检测到其表达，在HELF细胞中无表达。流式细胞显示pBTdel一279一hCD137L转染效率低于pcDNA3一 hCD137L。结论 hTERT启动子调控下CD137L表达载体构建正确，并可在卵巢癌细胞中较高表达，为探讨 靶向基因治疗提供了实验依据，但hTERT启动子活性仍低于CMV启动子。 关键词：卵巢肿瘤；CD137L；人端粒酶逆转录酶；基因疗法 中图分类号：R737．31 文献标志码：A Construction and expression of the vector of CD 1 37 L under the control of the hTERT promoter in human ovarian tumor cell lines ZHANG Xi。，CUI Bao-xia。 MA Dao—xin2 KONG Bei—hua。 ， ， (1．Department of Gynecology and Obstetrics；2．Institute of Hematology，Qilu Hospital of Shandong University，Jinan 250012，China) Abstract：Objective To construct an expression vector of CD137L under the control of the h 1RT promoter and to investigate the expression of this gene in human ovarian tLffflor cell lines and the possibility of targeted gene therapy of CD137L．Methods The CD137L gene was cloned from the cell lines and Was inserted into the pcD] vector to form a new plasmid named pcDNA3一hCD137L．The plasmid Was digested by Hind m and XbaI，thell the