基因工程复习要点概要1.docVIP

基因工程复习要点 1】★基因工程(gene engineering):就是对不同生物的遗传物质，在体外进行剪切、组合和拼接，使遗传物质重新组合，然后通过载体转入微生物、植物和动物细胞内，进行无性繁殖，并使所需要的基因在细胞中表达，产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型。 2】★广义的概念：基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建, 即重组DNA技术。下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。 3】★基因工程四大要素：供体基因、载体、工具酶、受体细胞 4】★理论上的三大发现：证明了生物的遗传物质是DNA （基因工程的先导）、DNA的双螺旋结构和半保留复制机理、遗传信息的传递方式（中心法则） 5】★技术上的三大发现：限制性内切酶的发现（标志着DNA重组时代的开始）、DNA连接酶的发现、载体的使用 6】基因诊断：利用重组DNA技术作为工具，直接从DNA水平监测人类遗传性疾病的基因缺陷，因而比传统的诊断手段更加可靠。 7】基因探针技术：利用DNA碱基互补的原理，用已知的带有标记的DNA通过核酸杂交的方法检测未知的基因。 8】基因治疗（gene therapy）：将外源正常基因导入靶细胞，取代突变基因，补充缺失基因或关闭异常基因，达到从根本上治疗疾病的目的。 9】基因克隆的工具酶（instrumental enzyme of gene cloning）：应用于基因克隆中的各种酶的总称。 10】核酸酶：通过切割相邻的两个核苷酸残基之间的磷酸二酯键，从而导致核酸分子多核苷酸链发生水解断裂的蛋白酶叫做核酸酶。专门水解断裂RNA分子的叫做核糖核酸酶（RNase），从核酸分子的末端开始，一个核苷酸一个核苷酸地消化降解多核苷酸链，叫做核酸外切酶（exonuclease），从核酸分子内部切割磷酸二酯键使之断裂形成小片段，叫做核酸内切酶（endonuclease） 11】限制性核酸内切酶(restriction enzyme) ：一类能从DNA分子中间水解磷酸二酯键,从而切断双链DNA的核酸水解酶。(寄主控制与修饰现象P13) 12】I型酶：要求有特定的识别序列，但切点在序列以外的不远处 ★II型酶：蛋白质结构最简单，最常用。能识别专一的核苷酸序列，不兼有甲基化酶的活性，细胞内另有独立的甲基化酶，切点严格，而且就在识别序列之中。II 型限制性核酸内切酶的基本特性：在DNA分子双链的特异性识别序列部位，切割DNA分子产生链的断裂。2个单链断裂部位在DNA分子上的分布，通常不是彼此直接相对的。断裂的结果形成的DNA片段，也往往具有互补的单链延伸末端、识别双链DNA分子中4 - 8对碱基的特定序列、大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧、识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构。（EcoRI等产生的5′粘性末端、PstI等产生的3′粘性末端、PvuII等产生的平头末端） III型酶：有专一的识别序列，距离是严格的。 IV型酶：只切割碱基已被甲基化、羟甲基化或葡糖-羟甲基化的DNA序列。 13】限制性核酸内切酶的命名 属名 种名 株名 Haemophilus influenzae d 嗜血流感杆菌d株 EcoRⅠ大肠杆菌 RY13之酶Ⅰ、HindⅢ嗜血流感杆菌Rd之酶Ⅲ、 AluⅠ藤黄节杆菌 之酶Ⅰ、HaeⅢ埃及嗜血菌之酶Ⅲ ★命名法：属名（大写，斜体）、种名（小写，斜体）、株名（正体）eg:Hind III=H in d 14】同裂酶(isochizomer):也叫同切点酶，异源同工酶，这类酶识别相同的序列，但是切割点不一定在同一点上。 15】同尾酶(isocaudamer)：是一类来源不同中，识别序列也不同，但对DNA切割所产生的粘性末端相同的一类酶。 16】杂种位点一般不能被原来的任何一种同尾酶所识别。 17】限制片段末端的连接作用有两种类型：①分子间的连接：不同的DNA片段通过互补的粘性末端之间的碱基配对而彼此连接起来 ②分子内的连接：由同一片段的2个互补末端之间的碱基配对而形成的环形分子。 18】1 U 核酸内切酶的酶活性：在最佳反应条件下反应 1 小时，完全水解 1 μg 标准DNA所需的酶量 19】影响核酸内切限制酶活性的因素 ：①　DNA的纯度（加大酶的用量，1 mg DNA 用 10U 酶、加大反应总体积、延长反应时间）②　DNA样品的甲基化程度③　酶切消化反应温度，大多数酶标准反应温度都是37℃。④　DNA的分子结构⑤　核酸内切限制酶的缓冲液，核酸内切酶的标准缓冲液的组份包括：氯化镁、氯化纳或氯化钾、Tris-HCl（三羟甲基氨基甲烷盐酸），?-