核酸萃取.PDF

海洋生物保育特論實驗操作單 元 –實驗 一之二 核酸 萃取 （DNA Extraction ） 遺傳物質 （基因 ）存在於細胞核中的 DNA 。人類基因體 大約含有 30 億個 鹼 基 ，這些鹼 基共同 組成約30000 個 基因 ，調 控人體不同的 生理反應 。人與人 間的 基因相似度極高 （約99.9％），只有不到0.1％的 差異 ，卻可 以造就 出完全 不同個體 。生物體不同 組織的細胞其所含的 DNA都是相同的 ，並不會因 為組織 差異 而有所 不同 ，也就是說 不論是從血液 、口腔黏膜 、毛髮或是 其它的細胞組織 所 萃取 出來的 DNA都是相同的 ，並不會因 為檢體 來源不同 而有所改變 。l 萃取純化 DNA的 方法很 多，目前最常見的 方法分成兩類 ：管 柱萃取純化 法 a i （Column Purification ）與試 劑萃取純化 法 （Reagents Purification ）。在試 劑萃取 r 純化 法方面 ，又 分成兩類 ：有機溶劑萃取法與非有機溶劑萃取法。每種 萃取方法 T 各有其優點 、缺點 ，然而，由 於有機溶劑具腐蝕 毒性，人員在操作安全上需特別 小心，同時 其廢棄 物的 處理 亦較 為煩瑣 ，因 此，使用 非有機溶劑萃取方法已慢慢 r 成為趨勢 。 e 1.管 柱萃取純化 法 （Column Purification ）：其原理 主要是 先以陰離子性清潔劑 v w i t 將細胞打破 ，並使蛋白質變性 ，以抑制 DNase的活性 ，隨後加入蛋白 分解 r . 酶 K （Proteinase K ）讓 DNA 上的蛋白質解 離 ，以增加 DNA 產率。接著 將 m o 此含有 DNA的混合 物滴入純化管 柱中 ，DNA 會 與純化管 柱中的 過濾膜結 Dc . 合 ，其它物質不會 與過濾膜結合 而流出，最後再利用緩衝液將過濾膜 上的 n DNA 洗提使 其流出。 F o e z D . 2. 有機溶劑萃取純化 法 （Organic Sorvant Reagents Purification ）：其原理 主要是 w 利用有機溶劑酚： （Phenol ）、氯仿 （Chlo