DPPH·体外清除实验研究萝芙木水溶性生物碱抗氧.docVIP

　　DPPH·体外清除实验研究萝芙木水溶性生物碱抗氧 【摘要】 目的研究萝芙木水溶性生物碱(ethods The condition l of 6.5×10-5mol·L-1DPPH·+0.5 ml of sample solution e of 30 min. The relation betining IC50 values l and IC50(TBHQ)=1.267×10-5 g/ml.Conclusion R serpentina can be used as natural antioxidant. 　　Key 等[11]报道了印度萝芙木标准提取物能够保护小鼠心肌免受过氧化自由基的伤害。由于萝芙木的民间用药多为水溶性成分，为了对萝芙木传统的药理作用做进一步的应用研究，本实验以海南引种的催吐萝芙木Rauvolfia vomitoria Afzel. ex Spreng为原材料制备水溶性生物碱，并对其进行体外清除DPPH·自由基活性的研究，测定自由基的清除能力，评价萝芙木的抗氧化活性。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料与试剂催吐萝芙木干根(海南省五指山市海南制药厂提供)粉碎过40目筛，TBHQ(广东省食品工业研究所)，有机溶剂均为国产分析纯。 　　DPPH·母液：称取25.77 mg DPPH·(2,2-二苯基-1-苦基肼，sigma-Aldrich)溶于少量体积分数为95%乙醇中，最后定容至100ml(即6.5×10-4mol/L)，置于冰箱中冷藏备用。 　　1.2 仪器与设备722S可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)，BT-244-S型电子天平(德国Sartorius)。 　　2 方法与结果 　　2.1 水溶性生物碱的制备以催吐萝芙木生药粉为材料制备乙醇提取物浸膏，然后采用雷氏铵盐沉淀法制得水溶性生物碱，具体方法见文献[12]。 　　2.2 萝芙木水溶性生物碱清除DPPH·自由基能力 　　2.2.1 水溶性生物碱清除DPPH·能力的测定方法采用文献[13, 14]所述方法：将DPPH·贮备液用体积分数95%乙醇稀释至6.5×10-5mol/L。按表1加样，总体积3 ml。用光径1 cm的比色皿在517 nm处测定各吸光值(A)。每一吸光值平行测定3次，最后取其平均值。DPPH·自由基清除率按式①计算： 清除率(%)=(1-Ai-AjAo)×100% ①　表1 DPPH·反应体系加样表 　　2.2.2 DPPH·自由基稳定性实验为了了解DPPH·自由基体系在催吐萝芙木水溶性生物碱作用下吸光值A随时间的变化规律，取适量水溶性生物碱用体积分数95%的乙醇配制成质量浓度为0.5 mg/ml样品溶液，按照“2.2.1”项下方法，每隔2 min测定吸光值A。吸光值随时间变化规律如图1。A值在最初20 min内下降较快，在20～30 min内，反应体系的A值变化缓慢，30 min后A值基本保持不变。故测定催吐萝芙木水溶性生物碱与DPPH·自由基的反应时间为30 min。 　　图1 加样品后DPPH·吸光度A随时间变化曲线 　　2.2.3 DPPH·自由基清除率与样品浓度关系称取适量水溶性生物碱用体积分数95%的乙醇倍比稀释配制成质量浓度分别为1.6，0.8，0.4，0.2，0.1，0.05 mg/ml的样品溶液。测定各样品溶液对DPPH·自由基的清除率。催吐萝芙木水溶性生物碱对DPPH·自由基清除率与样品浓度关系见表2。表2 水溶性生物碱对DPPH·自由基的清除效果 　　根据上述数据，可得催吐萝芙木水溶性生物碱清除DPPH·自由基的剂量-效应关系，如图2。由图2可知，在0.05～1.6 mg/ml范围，DPPH·自由基清除率随着样品质量浓度的增加而增大，在0.05 mg/ml时，清除率为19.094%，而在1.6 mg/ml时，清除率达到91.586%。 　　图2 催吐萝芙木水溶性生物碱对DPPH·自由基清除作用的剂量-效应关系 　　2.2.4 数据分析采用SAS(STATISTICAL ANALYSIS SYSTEM)8.0统计软件对表2数据进行统计分析，以Reg过程进行一元非线性回归分析，建立催吐萝芙木水溶性生物碱对DPPH·自由基清除作用的剂量-效应回归方程。 　　回归方程显著性分析见表3，模型Y=a+bX+cX2的参数a=17.588 48，b=127.701 26，c=-51.170 06，a达到显著水平(Plt;0.05)，b和c均达到极显著水平(Plt;0.01)，在此基础上建立的催吐萝芙木水溶性生物碱对DPPH·自由基清除作用的剂量-效应回归方程为式②。相关系数R2=0.983 8，说明该回归方程具有可靠性，能较好的解释催吐萝芙木水溶性生物碱对DPPH·自由基清除作用的剂量-效应关系。Y=17.588