TNFα对TP酶的调节及其对5FU前体药作用.docVIP

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TNFα对TP酶的调节及其对5FU前体药作用.doc

  TNFα对TP酶的调节及其对5FU前体药作用 【摘要】 目的: 探讨TNFα对胸苷磷酸化酶(TP酶)的调节及其与5FU前体药化疗敏感性的关系. 方法: 应用TNFα诱导肿瘤细胞中的TP酶,ELISA法检测肿瘤组织中TP酶蛋白水平,采用MTT法检测药物敏感性变化. 结果:大肠癌细胞株Lovo和SCF7中的TP酶含量为(30.1±1.4) μg/g,高于MCF/ADR的TP酶(18.8±0.4) μg/g. TNFα上调MCF7和MCF/ADR中TP酶表达呈时间和剂量依赖性. 耐药株MCF/ADR中TP酶上调高达(28.4±1.2) μg/g,未达非耐药细胞株水平. MCF7细胞中TP酶上调1.27倍,对氟铁龙的IC50降低了1.33倍,有统计学意义. 结论: TNFα能剂量时间依赖性上调肿瘤细胞的TP酶,TNFα为5FU前体药化疗增效. 【关键词】 胸苷磷酸化酶;氟尿嘧啶;氟尿苷;卡培他滨;肿瘤坏死因子α   【Abstract】 AIM: To explore the regulative action of TNFα on thymidine phosphorylase(TP) and its effect on the sensitivity of prodrug to 5fluorouracil(5FU) in cancer cell lines. METHODS: The TP level of tumor cells earsured by ELISA. And then the MTT assay all concentration of TNFα. RESULTS: The TP in Lovo or SCF7 displayed a 1.27fold increase, e dependent increase in the level of TP and enhance the sensitivity of MCF7 to 5FU.   【Keyidine phosphorylase; fluorouracil; floxuridine; capecitabine; tumor necrosis factoralpha   0引言   胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP酶)是近年来发现的嘧啶核苷代谢过程中的一个关键酶,是5FU前体药物(卡培他滨、脱氧氟尿苷)转化为氟尿嘧啶的最后一个限速酶. 近来一些研究表明,胸苷磷酸化酶与肿瘤的化疗关系密切,它能增强患者对5氟尿嘧啶(5FU)前体药物化疗的敏感性,提高化疗效果,改善肿瘤患者的预后[1]. TNFα,INFγ等多种因子能够上调肿瘤细胞内TP酶的表达. 我们应用TNFα诱导结肠癌和乳腺癌细胞中TP上调并观察其对5FU前体药物的细胞毒作用,为指导临床用药提供理论依据.   1材料和方法   1.1材料   人结肠癌细胞株Lovo和SCF7和MCF7/ADR由天津肿瘤医院中心实验室保存. RPMI1640培养液、胎牛血清购自Gibco公司,MTT和DMSO为Sigma公司产品. 氟铁龙为上海罗氏制药有限公司生产;5FU(250 mg/支)为天津金耀氨基酸有限公司生产;重组改构人TNFα(5 MU/支)为上海赛达生物药业有限公司生产. TP酶检测试剂盒为罗氏诊断公司提供. BCA蛋白浓度测定试剂盒为碧云天生物技术研究所提供.   1.2方法   1.2.1TNFα对肿瘤细胞中TP酶的调节将长满培养瓶对数生长期细胞用无菌PBS洗涤后加入2.5 g/L胰蛋白酶消化细胞,800 r/min离心8 min,加入培养液调整细胞密度为4×109/L. 每瓶加入细胞悬液1 mL,再加入培养液4 mL. 37℃,50 mL/L CO2,饱和湿度培养箱继续培养24 h. 弃去原培养液,加入含20,200,1000 kU/L TNFα的新鲜培养液,继续培养48 h,消化、收集、冻存细胞. 另培养24 h后弃去原培养液,加入含TNFα的新鲜培养液,使培养液中TNFα的浓度为200 kU/L,继续培养24,48,72,96 h,消化、收集、冻存细胞. 取出-80℃冰箱中冻存的细胞,反复冻溶5次,使细胞充分裂解. Eppendorff离心5 min(13 000 r/min),后收集上清150 μL. 按照说明书利用BCA法检测上清液蛋白浓度,ELISA检测肿瘤细胞中胸苷磷酸化酶水平. 应用SPSS统计分析软件,绘制标准曲线,再根据测得的A值计算出TP酶浓度. 肿瘤细胞中的TP酶含量(μg/g)=样品TP酶浓度(μg/L)/上清液蛋白质的浓度(g/L).   1.2.2MTT法检测药

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