不同低温冷冻预处理对异体神经移植再生影响的实验研.docVIP

　　不同低温冷冻预处理对异体神经移植再生影响的实验研 【摘要】 　　目的 观察不同冷冻温度下保存的异体神经对周围神经缺损修复的效果。方法 取96只同种属雄性大鼠，其中24只为取材组，72只随机分为对照组（A、B组）和实验组（C、D、E、F组），每组12只。A组为新鲜自体神经移植组,B组为新鲜异体神经移植组,C、D、E和F组分别为经4℃、-50℃、-80℃和-196℃甘油保存3周的神经移植组。术后2周，进行免疫组织化学观察；术后9、16周进行大体观察、光镜检察、电生理测定。结果 术后2周， B组移植段见明显T淋巴细胞浸润，C、D、E组次之，A组及F组未见T淋巴细胞。术后9周及16周，从神经再生效果评价看：A组神经再生效果最好， F组次之，C、D、E组再次，B组最差。结论 在各冷冻组中，以 -196℃组神经再生效果最好，接近新鲜自体神经移植组。 【关键词】 低温 神经移植 周围神经 预处理 　　Abstract： Objective To investigate the regeneration of peripheral nerve allografts stored in the glycerol of different temperature.Methods A total of 96 male ined munohistochemistry to observe the infiltration of lymphocyte to the grafts and regeneration of sciatic nerve and fiber.Nine and 16 ined icroscope.Results phocytes at the grafts in group B phocytes phocytes ent,grafts in group B e bete second,the next perature is -196℃. 　　Key ia;nerve allograft;peripheral nerve;pretreatment 　　周围神经缺损的修复，尤其是对长段神经干缺损的修复，其处理仍为临床上较棘手的问题。自体神经移植被公认为是修复神经缺损的最佳选择，但自体可供移植的神经有限、还会给供区带来功能损害，临床应用受到一定的限制。如何找到一种或者几种合适方法的联用，有效降低移植神经的免疫原性、增加神经纤维的再生能力，将对临床上异体神经移植的常规开展起到积极的作用。目前效果较为肯定的预处理方法是低温冷冻，而保存在怎样的冷冻条件下效果最好，同样是我们所关注的。本研究的目的是用甘油做保存液，观察在不同冷冻温度下保存的异体神经对周围神经缺损修复的效果，以探求出最佳的冷冻温度。 　　材料与方法 　　1 动物与分组 　　健康同种属雄性Wistar大鼠96只，月龄2月以上，体重（300±20）g。其中24只为取材组，72只随机分为对照组（A、B组）和实验组（C、D、E、F组），每组12只。A组为新鲜自体神经移植组,B组为新鲜异体神经移植组,C、D、E和F组分别为经4℃、-50℃、-80℃和-196℃甘油保存3周的神经移植组。 　　2 主要仪器及试剂 　　显微手术器械，冰箱（容声，广东）,双目显微镜（奥林巴斯，日本）,病理组织包埋台（BMZⅢ型，苏州）,超薄切片机（Rechert Ｕltracut E型，德国）,电子显微镜（H-600，日本）,肌电检测仪（KEY point V 3.22，Medtronic，美国）,小鼠抗大鼠CD4和CD8单克隆抗体(英国Serotec公司),兔抗人GAG单抗(美国SantaCruz公司) ,生物素标记的兔抗大鼠血清(美国Sigma公司) 。 　　3 方法 　　3.5%水合氯醛1ml/100g腹腔麻醉。在大鼠股后外侧行纵行切口；从梨状肌孔下0.5cm处，用消毒剃刀片，切取神经干1.0cm。取材组：取24只大鼠双侧坐骨神经干取下1.5cm长，本实验4组(4×12)神经，置于37℃条件下，依次浸泡于50%、70%和85%的甘油中各3小时，再分装在盛有85%甘油EP管中密封，分别置于4℃、-50℃、-80℃冰箱与-196℃液氮瓶中（采用分阶段降温措施，降温速度1～1.5℃/min），保存时间均为3周。对照组A：将坐骨神经取下后立即移植给自体的对侧；对照组B：将坐骨神经取下后不作任何处理，立即相互交叉移植作为新鲜异体神经移植。实验组C、D、E、F组：分别在3周后在随机原则下将各组12条神经分别移植给12只大鼠。 　　4 观察指标 　　大体观察；术后2周每组取2只大鼠做小鼠抗大鼠CD4和CD8单克隆抗体双标免疫组化；术后9周及16周，每组随机抽取5只，做以下检测指标：组