胸腺素α,1串联体基因的克隆表达、产物纯化及其生物学活性研究.pdfVIP

胸腺素a。串联体基因的克隆表达、产物纯化 及其生物学活性研究 硕士研究生 薛晓畅 导 师 颜真 副教授 张英起教授 辅导教师 韩苇副教授 石继红 讲师 第四军医大学生物技术中心西安710033 摘 要 ／人类对胸腺f荫研究已有150多年的历史．1965年由Goldgcein等从小 I 牛胸腺的无细胞漫出液中，经初步纯化得到了胸腺素．胸腺素％(thymosin 由28个氨基砬残基组成的热稳定酸性多肽，分子量为3．ikD。它由动物胸臃 上皮细胞分泌，在体内分布广泛，是一具有多种生物学活性的免疫调节刺， ＼ 可调节细胞免疫功能，有较好的抗衰老和抗病毒作用等．，、目前，T0c1已用于治 ／ 疗原发和继发性免疫缺陷病以及免疫功能失讽所引起的疾病，对肿瘤有很好 的辅助治疗效果，也用于再生障碍性贫血、急慢性病毒性肝炎等，无过敏反 ／ 应和不良剐作用．(然而，由于。甄分子量很小，很难利用基因工程方法直接 、 获取，目前商用的毋％多为化学合成或从胸腺中提取，或者价格比较昂贵， 或者成分混杂，使得Tocl的推广应用受到限制J 为了大量制备啦，以及探讨Toq串联体可能的生物学活性，我们用人工 方法按熙大肠杆茵惯用密码子合成T％基因片段，经退火及PCR反应获取了他。 点之问，经DNA涮序正确后克f蚤入融舍蛋白表达戴体pThioHisA，转化大肠 效表达，SDS-聚丙烯酰胺凝肢屯泳分析表明融合蛋白占茸体总蛋白的30％以 FF阴离子交 上，且主要以可溶性形式存在．经80℃热处理及Q-Sepharose 换柱层析，可获取高纯度I)95％)的融合蛋白．融舍蛋白经CNBr裂解后分别用 SP-Sepharose FF阳离子交换往及O—Sepharose职阴离子变换拄屡析分离纯 化，可以获得To【10串联体，经初步测定表明该串联体具有与化学合成品相 当的生物学活性，在有熊分裂原ConA存在时可以刺激小鼠淋巴细胞的分裂增 殖以及上调细胞表面IL一2R的表迭水平． f欲．真正实现T％的价值，就要借助高密度发辞技术把研究结果提高到工 k 业生产的规模．在经过试管以厦三角摇瓶水平对培养务件进行摸索后，我们 成功地实现了该工程茸的高密度发酵，3L茵液获得湿首体1409，蛋白表达水 平与试管水平相当． 、 谊研究为T0cI的进一步研究度其大规模开发生产奠定了基础．』 关t词：胸腺素％；串联体；基因克隆；克隆鬟体；表达裁体；融合表达 融合蛋白；地咏活性测定；炭啭妇欺 2 the tandem nd of thymosht仪lpne repeat aonllg,expreUion of馈e factionresearch peplide-曲黼M咖晒m purifkttton from ex在actionsolutionof