重金属的免疫检测综述-生态环境学报.doc

重金属免疫学检测研究进展 江天久*，牛 涛暨南大学，广州 510632摘要：重金属的免疫检测是一种新型的重金属检测方法，与传统检测方法相比，具有省时、省力、费用低廉、便于携带、易于操作等优点，能用于重金属的现场快速检测常规检测，这对于重金属污染地区的补救和恢复工作具有很大的意义，因而发展和普及应用潜力很大。金属特异性抗体抗原的结合属性重金属A 文章编号：1672-2175（2005）04-0590-06现已知至少20种左右的重金属有很大的毒性，它们中又有一半以上被大量释放到环境中，对人类健康造成严重威胁。目前常用的重金属检测方法石墨炉原子吸收光谱、ICPAES、X射线荧光光谱等这些能精确测量样品中单种金属的总量，但检测相对费力、费时费用昂贵需要大量的样品预处理不能提供金属的氧化状态或者演变信息。由于缺点的限制，样品数一般会少于最佳数量，导致在随后进行的污染程度风险评估较大的不确定性[]。 重金属免疫学检测方法的建立为检测提供了另一种途径。方法、费用低廉、简单易高度的灵敏度和选择性[1~4]。这种方法理论上能应用于能产生合适抗体的任何污染物质。自从Reardan等人首次通过金属鳌合剂抗原产生并分离出单克隆抗体以来[]，国外越来越多的抗Hg、In、Cd、Pb、U等金属鳌合剂复合物抗体被研制出来[]。本文综述了单克隆抗体的制备、免疫学检测方法的建立以及的结合属性的研究。重金属特异性单抗的关键点在于抗原的制备。金属离子自身不能作为有效的抗体识别目标，因为它们带有电荷，趋向于与生物分子发生强烈的不可逆的反应（这也是重金属的毒性所在），与生物分子的反应，这种鳌合能提供一个被免疫系统识别外壳 [1]。应用此理论在制备重金属特异性单抗时发现重金属鳌合剂复合物是低分子量半抗原，不足以引起小鼠免疫反应的发生，选用结构较复杂的大分子鳌合剂将其偶联到载体蛋白（BSA或KLH）上[1, 6~12]。制备金属单抗或合成鳌合剂抗抗体结合属性分析重金属竞争性免疫检测方法.1 重金属检测法 重金属检测法是通过重金属离子与鳌合剂形成溶解性的金属鳌合剂复合物（溶解抗原）与已经包被在板的金属-鳌合剂-蛋白复合物（固化抗原）竞争抗体位点，酶标二抗和显色物质产生信号，与标准曲线对照得出重金属离子浓度[, 10]。.2 重金属KinExA免疫检测方法 KinExA是一种计算机控制的流式荧光计，用来进行自由抗体、自由抗原和抗体-抗原复合物的快速分离和定量检测[1]。KinExA由毛细管流/观察单元组成并配有多微孔筛，各种被测液能在负压下通过筛。统一大小的小珠堆积在筛子上形成了一个填充床，其表面包被固化抗原。与一样，中的重金属离子先与过量鳌合剂鳌合形成溶解抗原，加入抗体并使抗体和溶解抗原结合达到平衡，然后这种溶液快速包被有固化抗原的小珠，这时还具有结合位点抗体被小珠捕获，用缓冲液冲洗，加入酶标二抗和显色剂显色，通过PC界面来检测和记录荧光信号，与标准曲线对照得出金属离子浓度[, 15]。 Blake等人分别用KinExA和对Cd2＋、Co、U、Pb离子进行检测[]。结果显示KinExA法其原因可能在于[, 10]：（1）包被固化抗原的小珠具有较大的表面积；（2）检测液以较高的流速通过小珠，这样能降低其在反应界面的扩散；（3）抗体与固化抗原接触时间有限（250400 ms），这样能减少抗体重复结合到固化抗原上（4）抗对溶解性抗原和固化抗原的结合力不同。初步试验表明KinExA 3000具有用作环境样品重金属离子免疫检测传感器的能力后来Blake等人出检测Cd的免疫传感器模型，它能精确地测量适度复杂样品矩阵，达到与ICPAES可比的检测水平[]。目前KinExA仪器对重金属进行检测，Blake等人与Sapidyne仪器公司和KinExA制造商进行合作使这种仪器小型化应用现场检测[]。 一步竞争性重金属免疫检测法 在检测的基础上，Darwish等人采用一步竞争性免疫检测法对水样中的Cd离子进行检测[]。其原理是把检测抗体包被在板内，金属离子先与过量鳌合剂混合形成金属-鳌合剂复合物，与已知浓度的金属-鳌合剂-酶复合物混合，二者在包被有抗体的微孔中竞争抗体的结合位点，冲洗后加底物显色与标准曲线对照得出金属离子浓度。这种方法与不同之处在于：（1）包被在微板内的前者是抗体，后者为金属-鳌合剂-蛋白质复合物抗原；（2）金属离子形成金属-鳌合剂复合物后前者是与金属-鳌合剂-酶复合物竞争检测抗体结合位点，从而不需要添加酶标二抗（一步竞争法由此得出），后者是与金属-鳌合剂蛋白质复合物竞争。 Darwish等人一步竞争性免疫法灵敏、简便，其pH值在7.07.6范围不产生抑制，优于的PH值范围（7.07.2）这种相对较宽的pH工作范围减少了对检测的pH值限制它对Cd离子的检测限能