固相合成聚乙二醇化植物硫素工艺研究.pdfVIP

synthesisfor Solid—phase system PegylatedPhytosulfokine DissertationSubmitted to Nanj of ingUniversityTechnology in fulfillmentof partial requirement forthe of degree Masterof Engineering By MiaoJIN 摘 要 植物硫素是存在于植物体内的磺化肽类物质，对促进植物增殖和分化具有重 要作用。微波技术和聚乙二醇化修饰技术均是近年来发展起来新技术，在众多领 域都得到了广泛的应用。本研究采用微波辐射法辅助固相合成肽类激素一植物硫 素，以其为主体进行PEG化修饰，并初步研究其在植物体内的活性效应。 实验首先对微波技术辅助合成植物硫素的工艺进行研究。在固相合成植物硫 素前体五肽过程中，实验选择了不同反应量的氨基酸与2．氯树脂进行偶联。当氨 基酸与树脂反应比例为l：2时，计算得到氨基酸与树脂结合率为26．0％，则树 件进行摸索后确定，在以N，N．二甲基乙酰胺作为磺化溶剂，吡啶含量为1：4， 微波反应温度40℃，40s升温的条件下，微波辐射反应10min，并在O℃的冰浴 中用90％三氟乙酸切割试剂切割60min。得到植物硫素结合率为51．3％，总产物 磺化程度达到70．0％。 实验同时探讨了植物硫素的聚乙二醇化修饰工艺及各合成物质的植物活性 度。以树脂．肽为起点，比较了微波磺化和聚乙二醇化反应顺序对实验结果的影 响。最终确定在先磺化后聚乙二醇化修饰的反应过程下，采用mPEG．OCH3CHO 对其进行偶合。反应条件为20。C，pH为6的条件下反应24h，其中修饰剂和还 原剂与树脂．PSK端游离氨基的反应比例分别为15倍和12倍。经反相高效液相 色谱．质谱分离分析，证明所得产物为目标物PEG．PSK。采用TNBS法测定PEG 修饰率，小担载量树脂偶合效果相对较好，修饰率达到41．O％。在比较植物固相 化培养和绿豆种子发芽的活性实验结果后得到合成产物PEG．PSK和植物硫素 PSK均具有较高的植物活性，与空白对照样品中的激素KT，2，4．D相比，相对 活性分别为17．O％和12．8％。 关键词：植物硫素微波辐射聚乙二醇化固相合成 ABSTRACT sulfated in existed Phytosulfokine(PSK)，apendapeptidewidely plantkingdom， hasshown activitiessuchas anddifferentiation．The mutiplebiological proliferation ofmicrowaveirradiationand asnew becomemore application Peglationtechnology anduseful．Inthis was solid popular paper，phytosulfokinepreparedby phasepeptide effectofmicrowaveon reactionWas synthesis(SPPS)and the—