大菱鲆抗病相关MHC II B等位基因筛选与分析.pdfVIP

11 大菱鲆抗病相关MHCB等位基因筛选与分析 II 大菱鲆抗病相关MHC B等位基因筛选与分析 摘要 目前，由于水产业的高速发展，高密度养殖及环境的恶化使水产鱼类病害频 发。培育抗病品种，已成为促进水产业发展的一大重要课题。大菱鲆作为我国重 II 要的养殖鱼类，这一难题也急需解决。MHCB在先天免疫和后天获得性免疫 II 中起着重要作用，并且已有大量研究证明：lVIHCB不同等位基因与机体对病 II 原菌的抗性或易感性有着密切关系。所以，我们研究了大菱鲆MHCB基因的 多态性，以及不同等位基因与大菱鲆抗病性之间的关系。 1．大菱鲆致病菌的鉴定 我们通过16SrDNA序列分析鉴定了大菱鲆致病菌．迟钝爱德华氏茵。该病原 茵来自于实验室保存菌株，是在大菱鲆疾病暴发时期，从其腹腔内分离获取的单 克隆。利用细菌16SrDNA保守区引物8F和1492R扩增其16SrDNA部分序列， 并进行克隆测序。通过测序共获得1505bp的序列，所测三个转化子各不相同。 ictaluri和Edwardsiellatarda。通过进化树分析可以发现，我们所得到的序列与 Edwardsiella tarda亲缘关系最近，而与Edwardsiellaictaluri相差较远。并且其中 一条序列16SrDNA．2与Edwardsiellaictaluri和Edwardsiellatarda序列比对时， 其与Edwardsiellatarda有100％的相似度。考虑到细菌16SrDNA多拷贝间的差 异以及测序误差在内，因此，可以将大菱鲆病原菌鉴定为迟钝爱德华氏菌 (Edwardsiellatarda)。 II 2。大菱鲆MHCB多态性及其与大菱鲆抗病力的关系 II 通过对大菱鲆MHCB内含子l和外显子2的序列分析，共发现了4种不同 的内含子l(A、B、C和D型)，其不同是由于一19bp重复单元的重复次数不 ．同所致。内含子1的3’端含有一个富含CT／GT的区，该区域为重组酶RecA的 措在识别位点，表明在其演化史中可能发生过重组事件。 ’． 通过对43个抗病个体中的224条序列和42个易感个体中的214条序列进行 MHCIIB外显子2分析，共发现了59个不同的等位基因，其中包括35个A型、 1I 大菱鲆抗病相关MHCB等位基因筛选与分析 6个B型、13个C型和5个D型。对其中的25个等位基因进行了抗病群体与易 感群体的分布统计分析，部分等位基因在两个群体中都有分布，部分以较低的频 率仅出现抗病或易感群体中。等位基因Scma—DBBl*04在抗病群体中出现频率为 7％，而在易感群体中出现频率为42．9％，与易感性状相关60=0．ooo)；等位基因 Scma-DBB2幸Ol在抗病群体中出现频率为44．2％，而在易感群体中出现频率为 19％，与抗病相关够：o．013)相关。 关键词： 大菱鲆，迟钝爱德华氏菌，多态性，主要组织相容性复合体，抗性， 微重组 n 大菱鲆抗病相关MHCB等位基因筛选与分析 and with ofMHCIIBallelesassociated Screeninganalysis diseaseresistanceinturbot Abstract withfast of diseasesoecured