5HPLC各个部件基本原理探究.pptVIP

汪射泵_优点:在高输液压力下给出精确的无脉动、可重现的流量；可能过改变电动机的电压，控制电动机的转速，来改变活塞的移动速度，从而可调节流动相流理，使其输出流理与系统阴力无关；流量稳定，操作方便。 缺点：泵液缸容积有限，每次流动相输完后，需得新吸入流动相，不利于连续工作。密封性要求高，更换溶剂不方便，价格昂贵。 柱塞式往复泵 隔膜式往复泵:与柱塞式往复泵相似,只是流动相接触的不是活塞,而是具有弹性的不锈钢或聚四氟乙烯隔膜.隔膜经液压驱动脉冲式地排出或吸入流动相.优点:避免流动相被污染. 当使用含盐的流动相时,由于脱水或蒸发,有可能在宝石柱塞杆密封圈的后面形成晶体.泵运动时这些盐晶体会损坏密封圈和柱塞杆,因些最好每天开机前和关机后都要用纯净水冲洗一次密封圈. 1.低压梯度通过预先设定开启溶剂A,B时间比例电磁阀的运行程序,可控制二元混合溶剂流动相的组成,并连续输出具有不同极性的流动相.该方法可减小溶剂可压缩性的影响,完全消除由于溶剂混合引起的热力学体积变化所带来的误差.且仅需一个高压输液泵. 2.优点:两台高压输液泵的流量皆可独立控制,可获得任何形式的梯度程序,易于实现自动化.缺点:溶剂的可压缩性和溶剂混凝土全时热力学体积的变化,可能影响输入到色谱柱中的流动相的组成. 梯度洗脱注意溶剂之间的互溶性 更换非互溶性的流动相，需准备能与新旧流动相互溶的中介溶剂。 自动进样装置示意图自动进样器由进样阀、样品管、进样针头、样品瓶和支架等组成，下图是一自动进样装置工作原理示意图，样品放在支架上的样品瓶中，移动支架让样品瓶对准针头，下降针头刺破样品瓶上的膜吸入样品入样品环，升起针头使样品瓶移开，针头再复位。进样流动相从六通阀的１到２经过针头和定量管把样品顶入色谱柱。 （1）固定波长ＵＶ吸收检测器 光源可用低压汞灯，它能够发出９０%的２５４nm波长的光，锌灯发出214nm波长的光，镉灯则为229nm和326nm，由于得到的是固定波长的单色光，故不需要滤光片，光强高，但它只能对光源发射的特征波长有吸收的物质进行检测， （2）可变波长紫外吸收检测器 它与固定波长紫外检测器的主要差别在于使用一个连续光源（如氘灯），以光栅（或棱镜）分光。光源发出的复合光（从190nm至600nm附近），光栅分光能够随意选择定的检测波长以匹配被测物质的最大吸收波长。 3）二极管阵列检测器（ＤＡＤ） ?? 二极管阵列检测器可以记录190nm-900nm波长吸收光谱数据，可直接贮存色谱图中每一个点的吸收光谱。光源发出的光，通过透镜把光聚焦在检测池上。从检测池出来的光，通过透镜、狭缝到全息光栅上，经光栅分光后由一排光电二极管接收并转换为电信号，贮存于计算机中。ＤＡＤ的最大优点在于利用ＵＶ光谱识别并进行纯度分析，还可以画出保留时间、波长和吸光度的三维立体空间谱图等，这是目前较先进的紫外检测器。下图是DAD检测器工作原理示意图。 * HPLC原理介绍 Leo.xu reservior injector pump column detector Data system reservior injector pump column detector Data system reservior injector pump column detector 流动相脱气 吹氦脱气法 加热回流法 抽真空脱气法 超声波脱气法 在线真空脱气法 溶剂过滤头的清洗 1.取下过滤头放在(1:4,V/V)的硝酸溶液烧杯中超声清洗15分钟; 2.取出后用蒸馏水超声清洗10分钟; 3.用吸球吹出过滤头中的液体; 4.再用蒸馏水超声清洗10分钟; 5.用吸球吹净过滤头中的水份; 6.将过滤头重新插入溶剂瓶中(正相系统注意将过滤头烘干) 流程 泵体材料耐腐蚀 泵腔的体积要小，以便快速更换溶剂 能在高压下连续工作,耐压40-50MPa. cm2 压力平稳，无脉冲 高压输液泵 输出流量稳定，重复性高,输出流量范围宽 高压输液泵 恒流泵 恒压泵 注射型泵 往复型泵 双泵头往复式柱塞泵 双柱塞往复式串联泵 往复型泵工作原理图 双泵头往复式柱塞泵 1-流动相入口; 2,3-带有单向阀的泵头; 4-脉冲缓冲器; 5-偏心轮; 6-活塞; 7-电动机; 8-单向阀; 9-至进样口 双柱塞往复式串联泵 1-贮液罐; 2-泵I(柱塞I); 3-单向阀; 4-阻尼器; 5-泵II(柱塞II); 6-至色谱柱; 为什么要冲洗泵头呢? 1-低压计量泵; 1A,1B-时间比例电磁阀; 2-微处理机; 3-混合器; 4-高压输液泵; 5-至色谱柱 6-反馈控制器; 7-混合室; 8-流量计信号; 9-混合溶剂出口 高 压 梯 度 低 压 梯 度 1-程序控制器; 2-溶剂A; 3-溶剂B; 4-高压泵A; 5-高压泵B;