pH和温度对黑斑蛙消化道脂肪酶活力的影响.pdfVIP

第3l卷2期 安徽 师 范 大学 学报 (自然科学版) Journal of Anhui Normal University(Natural Science) V01．3l No．2 2008年3月 Mar．2 00 8 pH和温度对黑斑蛙消化道脂肪酶活力的影响 张盛周， 朱联九， 钱 玉， 程文娟 (安徽师范大学生命科学学院生物环境与生态安全省级重点实验室，安徽芜湖 241000) 摘 要：采用聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法，对黑斑蛙(Rana nigromaculata)消化道不同部位脂 肪酶活力进行了测定并考察了pH和温度对脂肪酶活力的影响 结果表明，黑斑蛙消化道不同部位 脂肪酶活力由高到低依次是中肠、后肠、前肠、胃和食道．pH和温度对脂肪酶活力的影响较大，二者 与脂肪酶活力的关系曲线均呈单峰型，胃和肠道脂肪酶的最适pH值分别为5．0和7，5，最适温度 均为40℃．此外对蛙类的人工养殖提出了几点建议． 关键词：黑斑蛙；脂肪酶；消化道；最适温度；最适pH 中图分类号：Q959．4 文献标识码：A 文章编号：1001—2443(2008)02—0159—04 黑斑蛙(Rana nigromaculata)属两栖纲无尾目蛙科，在我国分布很广，属两栖类的优势种群，具有重要 生态价值和经济价值，还是重要的科研和教学用实验动物．近年来，由于过度捕杀和生态环境的破坏，该蛙数 量急剧减少 为保护野生动物资源，同时满足人们的需求，人工养殖黑斑蛙已受到重视 研究消化酶的活力及 其影响因素可了解动物对食物不同成分的消化能力，为天然饲料的选择、优质人工饲料的配制和适宜养殖条 件的确立提供理论基础． 目前对低等脊椎动物消化酶的研究主要集中于经济养殖型鱼类_1 j和爬行类[ ，两栖类消化酶的研究 资料尚少．我们曾对黑斑蛙消化道蛋白酶活力进行过研究_8j8，黑斑蛙属肉食性，实验中我们发现黑斑蛙消化 道亦有较高的脂肪酶活力，本文对此进行报道，为蛙类的人工养殖提供基础资料． 1 材料和方法 1．1 实验材料 鲜活的成体黑斑蛙19只，采自芜湖市市郊，重50—100 g．毁髓处死，剖腹，迅速取出完整消化道，剪开， 用4℃0．65％的生理盐水快速洗净，按食道、胃、前肠、中肠和后肠(将小肠自中部剪断，前后部分分别作为前 肠和中肠，将直肠作为后肠)取材，用吸水纸轻轻吸干，称重． 1．2 粗酶液制备 依据所称得组织的克数，加入20倍体积的4℃蒸馏水，在冰浴中充分匀浆，捣成糜状．用冷冻离心机在 4℃下以4000 rpm的转速离心20 min．取上清液，即为粗酶提取液，保存于41S冰箱内，8 h内分析完毕． 1．3 脂肪酶活力测定方法 采用以聚乙烯醇橄榄油为底物的标准氢氧化钠溶液滴定N o9]：取磷酸缓冲液2．5 ml和聚乙烯醇橄榄油 乳化液2．0 ml于锥形瓶中，置35℃下预热5 min，然后在锥形瓶中加入1．0 ml酶液，35℃下反应15 min后 立即加入95％乙醇7．5 ml终止反应，再加3滴酚酞指示剂，用0．05 mol／L氢氧化钠标准溶液滴定，对照组 在加入95％乙醇后再加酶液，其余步骤相同． I．3．i pH对黑斑蛙脂肪酶活力的影响 以Na2HPO4一柠檬酸缓冲体系配制pH值为2．0—8．0的缓冲液， 以甘氨酸一氢氧化钠缓冲体系配制pH值为9 0—10 0的缓冲液．测定胃脂肪酶所用6种缓冲液pH值分别 为2．0、3 0、4 0、5 0、6．0和7．0，测定肠道脂肪酶所用9种缓冲液pH值分别为4 0、5 0,6 0、6．5、7．0,7．5、 8．0、9 0和i0．0，在35℃条件下按上述方法测定． 收稿臼期：2007—08—29 基金项目：安徽师范大学科研专项基金(2006xzxl 1)． 作者简介：张盛周(1970一)，男，安徽宿松人，副教授，博士；专业方向：动物细胞学与生理生化；E．mail：sazhang(~mail．ahnu．edu．cn 160 安 徽 师 范 大 学 学 报 (自然 科 学 版 ) 2008钲 1．3．2 温度对黑兜蛙脂肪酶活力的影响 由上面所测结果得出胃和肠道脂肪酶的最适p