活性炭对酥梨汁色素的吸附研究.docVIP

　　活性炭对酥梨汁色素的吸附研究 摘要链霉菌是放线菌中非常重要的一个属,具有广泛的物种多样性和代谢多样性,它能产生多种抗生素和其他活性物质,在临床和农业上具有广泛的应用。但是,由于链霉菌普遍存在的遗传不稳定性,大大限制了其功能的发挥。因而,除了通过新的技术手段筛选新的活性菌株,研究人员多采用对现有链霉菌的改造育种来实现抗生素产量的提高和稳定,或者生产新的抗生素。主要论述了链霉菌育种中常用的4种方法,即物理诱变、化学诱变、生物工程改造和复合诱变。同时,引证近年来链霉菌育种实例,对这些育种方法的作用机制进行了简要的阐述和总结。 　　关键词链霉菌;育种方法;作用机制 　　 　　自从1943年1搭载“神舟”四号飞船进行空间育种,结果筛选出5株遗传性能稳定的菌株,产酶能力提高了30%以上。尽管空间作用诱变对于链霉菌的选育具有良好的效果,但是由于搭载工具造价高昂、程序复杂等因素制约,空间诱变并非主流的诱变方法。除此之外,还有60Co λ射线育种、离子束诱变育种、通电处理诱变育种等物理方法。这些诱变方法也取得了一定的诱变成果。 　　 　　2化学因素诱变育种 　　 　　化学因素诱变育种主要是指利用一系列的化学物质,如亚硝基胍、盐酸羟胺、亚硝酸、抗生素、氯化锂、吖啶橙等物质,对链霉菌进行处理,导致基因组中碱基对发生转换、缺失和异位等,如氯化锂可导致AT-GC碱基对发生转换或碱基缺失,从而导致代谢途径等发生改变,产生高产的优良菌株。当前在链霉菌诱变育种上应用的主要是甲基磺酸乙酯、亚硝基胍和氯化锂。涂璇等[22]利用亚硝基胍诱变链霉菌702菌株,获得的高产突变株20-29-12,产素单位比出发菌株提高了38.08%。朱非等[23]以林肯链霉菌947-8为出发菌株,采用孢子热处理方法处理出发菌株孢子,后进行NTG诱变处理,得到的突变株,产林肯霉 素为1 218 γ/mL,产量稳定。黄晶等[24]利用硫酸二乙酯对金霉素链霉菌进行诱变,菌株的正突变率达到52%。由此可见,化学诱变的效率也是非常高的,对于链霉菌抗生素产量的提高有非常重要的作用。 　　3生物工程改造育种 　　 　　生物工程改造育种是随着生物技术的发展,尤其是细胞生物学、分子生物学、基因扣作等学科的发展而兴起的育种方式。本文主要从原生质体融合和基因工程育种2个方面对生物工程改造育种进行阐述。 　　3.1原生质体融合 　　微生物原生质体融合技术具有重组频率高、受结合型或致育型限制小以及遗传物质传递完整等优点。通常使用机械法或酶法去除细胞壁制备原生质体,之后在合适的条件下进行人为的诱导融合,采用营养缺陷型、抗药性、灭活标记或荧光染色标记进行融合子的筛选。应用原生质体融合技术可以有效地提高代谢产物的产量和质量;改良菌种的遗传特性,获得新的代谢途径和性状[25]。 　　原生质体融合中的关键环节在于原生质体的再生,刘金艳等[26]研究了玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63原生质体形成和再生条件,通过培养基选择、培养时间、甘氨酸浓度、溶菌酶浓度、酶解时间等条件选择和优化,成功获得了原生质体,为转化、基因表达奠定了基础。王记侠等[27]运用原生质体融合技术将重寄生链霉菌F46与生防链霉菌SC1融合,筛选出的融合子对灰葡萄孢的抑制作用提高了27.99%。陈芝等[28]对2株阿维链霉菌(阿维菌素高产株76-05和仅产阿维菌素B不产寡霉素的基因工程菌73-12)进行了原生质体融合,选育出仅产阿维菌素B不产寡霉素的高产菌株。原生质体去除了细胞外壁,仅保留脆弱的细胞膜,因而对各种诱变因素的敏感性强,正突变率高,但是需要解决原生质体再生的条件优化。 　　3.2基因工程育种 　　由于产抗生素的链霉菌遗传结构包括抗生素生物合成、抗生素抗性、氨基酸生物合成、色素生成和发育变化等方面的不稳定,大大制约了链霉菌的工业化生产。许多科研工将基因工程技术运用到了链霉菌育种之中,这包括:利用基因阻断、敲除、替换等突变技术了解基因的功能、表达、调控,进而进行抗生素的修饰、改造;采用各种基因操作技术,使不同化合物、不同的基因在同一菌株中重新组合,增加代谢产物的多样性[3];利用基因筛选程序,筛选含有特定类型化合物的基因产生菌,进而获得了相应的次生代谢产物[29];利用基因组重排技术对出发菌株进行处理[30]等。 　　基因组重排是以整个基因组为操作对象的一种DNA重排。其本质就是进行多次的原生质体的融合和再生。美国的Zhang首次提出了这一概念,并应用此技术提高了费氏链霉菌合成泰乐星的能力[30]。徐波等[31]人应用基因组重排育种方法筛选替考拉宁高产菌,其替考拉宁的产量从原始菌株的1 825 μ/mL提高到了3 016 μ/mL,增长了65.3%。徐波等[32]将普那霉素产生菌始旋链霉菌的孢子和原生质体