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支原体 细胞培养中的大敌 一说起支原体，估计细胞培养的人员就开始手心冒汗了。细胞培养中的急性污染往往容易察觉， 而支原体则像慢性毒药一般，杀细胞于无形中。除了非常有经验的老手，很多实验人员都察觉不到支 原体的污染。据统计，超过 25%的细胞系中感染了支原体，而研究者大多并不知晓。早期，血清可能 是主要的污染源；之后，通过实验室的仪器、培养基或其他试剂渐渐蔓延开来，细胞无不中招。怎样 才能根除讨厌的支原体污染呢？让我们先来认识这个小东西。 为我喜欢他们，而是25-30% 的细胞系都感染了 支原体。”支原体总在偷偷地改变细胞，篡改我 们的实验数据。怎么办？ 检测、检测、再检测 对培养物进行常规的支原体检测非常重要。 尽管各个实验室的检测频率不同，从几个星期到 几个月不等，不过这主要取决于你们实验室有多 （上图来自Invivogen 网站） 少人接触细胞，以及你们引进新细胞的频率。比 如美国国立细胞培养中心（NCCC），它经常从 狡猾的支原体 其他实验室获得细胞培养物，就会对每个样品进 支原体是唯一一种没有细胞壁的原核生物， 行检测，并将它们隔离，直至最后证明无支原体 大多呈不规则球状或丝状。由于它的直径小（约 污染。一般来说，每两三个月进行一次定期检测 为 0.15-2 µm ），而且形状灵活，所以能逃过实 是必要的。如果有新细胞进入实验室，或准备将 验室常用的滤膜。支原体的种类非常多，超过了 细胞进行液氮保存，都应该进行检测。当然，如 100 种。当然，大部分支原体检测都不可能检测 果细胞不大对劲，应立马检测。 到所有的种类。不过，在实验室中捣乱的支原体 检测频率是一方面，选择合适的检测方法也 也通常就是那一小撮。 很重要。到底是 PCR、生化分析、ELISA 还是 支原体生长缓慢，通常不破坏宿主细胞。然 免疫荧光呢？PCR 应该算是检测支原体的理想 而，它们能以许多不同方式改变细胞的新陈代 方法，它综合了几个优势：灵敏、特异、快速、 谢。细胞除了长得不好之外，几乎所有的实验表 廉价等。细胞培养上清可直接用来检测，非常方 现如蛋白表达也都会受到影响。传统的抗生素对 便。Sigma-Aldrich 公司的LookOut Mycoplasma 支原体并不奏效，因为它们大多破坏细胞壁的完 PCR Detection Kit，扩增的就是支原体基因组上 整性，而支原体恰恰没有细胞壁。这也就是支原 16S 核糖体RNA 基因。此区域高度保守，因此 体感染率高企的主要原因。曾有一位细胞培养专 可检测多达 19 种支原体。当然，为了避免假阳 家戏称：“我可是支原体方面的专家，并不是因 性和假阴性，实验中必须设立多种对照：阳性对 2008年12月17日第五十二期 第 8 页，共 21 页 下一页 返回 照、阴性对照和内对照。