褐藻胶裂解酶产生菌的分离鉴定及产酶发酵优化.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（９）：９４１０１ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 褐藻胶裂解酶产生菌的分离鉴定及产酶发酵优化 李　恒　朱思婷　刘旭梅　龚劲松　蒋　敏　许正宏　史劲松 （江南大学药学院　无锡　２１４１２２） 摘要　对一株从腐烂海带中筛选得到的产褐藻胶裂解酶的菌株进行鉴定，并对其产酶条件进行 发酵优化。经形态学、生理生化特征和分子生物学鉴定，将其鉴定为盐单胞菌属，并命名为 Ｈａｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＷＦ６。通过在摇瓶培养水平上进行单因素和多因素正交试验，确定褐藻胶裂解酶 产生菌ＷＦ６的最适产酶培养基为：褐藻酸钠６．０ｇ／Ｌ，蛋白胨５．０ｇ／Ｌ，酵母粉２．５ｇ／Ｌ，ＮａＣｌ３０ｇ／ ＋ Ｌ，Ｋ ５ｍｍｏｌ／Ｌ。进而采用最适培养基进行产酶条件的优化，优化后的发酵产酶条件为：初始ｐＨ ８．０，培养温度２５℃，接种量为２％，摇瓶装液量３０ｍｌ／２５０ｍｌ，培养时间３９ｈ。优化后的褐藻胶裂 解酶酶活达１１７．６６Ｕ／ｍｌ，是优化前的２．１倍。该酶对褐藻酸钠的酶解产物主要由聚合度为二和 三的褐藻寡糖组成。 关键词　褐藻胶裂解酶　Ｈａｌｏｍｏｎａｓｓｐ．鉴定　发酵优化 中图分类号　Ｑ９３ 　　近年来，随着人们对褐藻寡糖结构与活性认识的 体动物和海藻中分离得到。目前已报道的多种褐藻胶 不断深入，其特殊的生物活性及药用价值得到了广泛 裂解酶大都来 自于海洋微生物［８］，主要有弧菌 的开发。褐藻寡糖在医药、食品、化工、农业等领域均 ［９］ ［１０］ （Ｖｉｂｒｉｏ） ，假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ） ，固 有应用，其中在抗肿瘤、抗凝血、免疫调节及促进生长 ［１１］ 氮菌 （Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒｖｉｎｅｌａｎｄｉｉ） 、交 替 假 单 胞 菌 ［１３］ ［１２］ 等方面更是掀起了研究热潮 。 （Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｍｏｎａｓｅｌｙａｋｏｖｉｉ） 及 交 替 单 胞 菌 　　目前，褐藻寡糖主要由褐藻胶降解制备。常用的 ［１３］ （Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ） 等。褐藻胶裂解酶已被普遍认为是 ［４］ ［５］ 降解方法主要有物理降解法 、化学降解法 以及生 定向制备褐藻寡糖的有力工具，因此，不断扩大褐藻胶 ［６］ 裂解酶的菌种资源，进而实现褐藻寡糖的高效、高值化 物降解法 。物理法主要采取辐射的方式，操作复杂， 且降解条件难以控制；化学法是目前采用最多的方法， 应用成为目前研究的趋势和热点。 但由于本质是一种非特异性降解方法，因而存在目标 　　从腐烂的海带中筛选得到一株产褐藻胶裂解酶的 寡糖的产量少，副产物多以及回收率低等问题，受到越 菌株，依次对其进行了形态学、生理生化特性以及分子 来越多的质疑。利用酶的特异性降解褐藻胶是生物降 鉴定，并对培养基组成及培养条件进行了优化，为褐藻 解法的主要原理，该法具有专一性强、寡糖得率高且条 胶裂解酶的酶学性质研究及应用提供参考和借鉴。 件温和等优点，这些显著的优越性使生物降解法备受 １　材料与方法 青睐。 　　作为褐藻胶生物降解的主体，褐