右旋硫辛酸对人肝癌hepg2细胞生长增殖及其相关机制研究.pdfVIP

学 报 ３４８ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１７，４８（３）：３４８－３５４ 右旋硫辛酸对人肝癌 ＨｅｐＧ２细胞生长增殖及其 相关机制研究  刘　晶 ，黄严伟，周　波，宋清清 （南京工业大学，南京２１１８００） 摘　要　研究天然抗氧化剂右旋硫辛酸对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞生长、增殖的影响及其相关机制。采用ＭＴＴ检测细胞增殖情 况，活性氧试剂盒分析细胞内ＲＯＳ水平。流式细胞术和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色观察细胞凋亡和形态变化。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测凋 亡、自噬以及相关通路蛋白表达，包括 Ｂａｘ、Ｂｃｌ２、ｃａｓｐａｓｅ３、ＰＡＲＰ、ＡＴＧ５、ＡＴＧ７、ＬＣ３、Ｂｅｃｌｉｎ１、ｍＴＯＲ、Ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐ３８、Ｐ５３、 ＥＲＫ、Ａｋｔ、ＭＥＫ等。结果表明，经不同浓度不同时间药物处理，右旋硫辛酸可抑制ＨｅｐＧ２细胞增殖，提高细胞内ＲＯＳ水平， 并呈时间和剂量依赖性。右旋硫辛酸通过上调促凋亡蛋白Ｂａｘ，激活ｃａｓｐａｓｅ家族，从而激活凋亡效应蛋白ｃａｓｐａｓｅ３和 ＰＡＲＰ，同时右旋硫辛酸还可上调自噬相关蛋白ＡＴＧ５、ＡＴＧ７、Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３水平，抑制磷酸化ｍＴＯＲ和Ｐ７０Ｓ６Ｋ，激活自噬。 通路研究表明：右旋硫辛酸可上调磷酸化的Ｐ３８和ＪＮＫ促凋亡通路促进凋亡，抑制磷酸化Ａｋｔ、ＥＲＫ的表达。添加自噬抑 制剂３甲基腺嘌呤后，明显抑制自噬发生。因此，右旋硫辛酸可能通过调控Ｐ３８／ＡＭＰＫＪＮＫ，ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ和 Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ ＥＲＫ途径激活自噬，诱导细胞凋亡。 关键词　右旋硫辛酸；ＨｅｐＧ２；凋亡；自噬；肝癌 中图分类号　Ｒ９６５　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１７）０３－０３４８－０７ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ 引用本文　刘晶，黄严伟，周波，等右旋硫辛酸对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞生长增殖及其相关机制研究［Ｊ］．中国药科大学学报，２０１７，４８（３）： ３４８－３５４ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＬＩＵＪｉｎｇ，ＨＵＡＮＧＹａｎｗｅｉ，ＺＨＯＵＢｏ，ｅｔａｌＥｆｆｅｃｔｏｆＲ（＋）ｌｉｐｏｉｃａｃｉｄｏｎｇｒｏｗｔｈ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｌａｔｅｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎ ｈｕｍａｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａＰｈａｒｍＵｎｉｖ，２０１７，４８（３）：３４８－３５４ ＥｆｆｅｃｔｏｆＲ牗＋牘ｌｉｐｏｉｃａｃｉｄｏｎｇｒｏｗｔｈ牞ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｌａｔｅｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎ ｈｕｍａｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓ  ＬＩＵＪｉｎｇ牞ＨＵＡＮＧＹａｎｗｅｉ牞ＺＨＯＵＢｏ牞ＳＯＮＧＱｉｎｇｑｉｎｇ ＮａｎｊｉｎｇＴＥＣＨＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１１８００牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓＲ牗＋牘ｌｉｐｏｉｃａｃｉｄ牗ＲＬＡ牘ｏｎｃｅｌｌｓｇｒｏｗｔｈ牞ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｌａｔ ｅｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｉｎｈｕｍａｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｌｉｎｅｓ．ＭＴＴｗａｓｕｓｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｃｅｌｌｓｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ牗ＲＯＳ牘ｋｉｔｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅＲＯＳｌｅｖｅｌ．Ｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎｄＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８ｔｅｓｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ牞ａｕｔｏｐｈａｇｙａｎｄｒｅｌａｔｅｄ ｐａｔｈｗａｙｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｔｈｒｏｕｇｈＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ牞ｉｎｃｌｕｄｉｎｇＢａｘ牞Ｂｃｌ２牞ｃａｓｐａｓｅ３牞ＰＡＲＰ牞ＡＴＧ５牞ＡＴＧ７牞ＬＣ３牞Ｂｅｃ ｌｉｎ１牞ｍＴＯＲ牞Ｐ７０Ｓ