基于单细胞拉曼光谱技术的葡萄球菌黄素生物合成分析 - 分析化学.pdf

第44卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第3期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2016年3月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 456~461 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.150729 基于单细胞拉曼光谱技术的葡萄球菌黄素生物合成分析 *1 2 3 1,2 陶站华 摇 刘军贤摇 师德强摇 康 健 1 2 (广西科学院生物物理实验室,南宁530003)摇 摇 (广西师范大学物理科学与技术学院,桂林 541004) 3(广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心,南宁530003) 摘摇 要摇 利用光镊拉曼光谱技术研究吲哚对金葡菌细胞中葡萄球菌黄素合成的抑制作用以及色素含量在分 批培养过程中的动态变化。 收集经不同浓度吲哚(终浓度为0,0.2,0.6,0.8,1.2 和1.5 mmol/ L)处理后的以 -1 及不同培养时间的金葡菌单细胞的拉曼光谱,以光谱1523 cm 峰强度表征色素含量,并与紫外可见分光光度 -1 法得到的结果进行比较。 结果表明,细菌拉曼光谱1523 cm 峰强度与分光光度法测得的色素含量有良好的 线性关系,相关系数达0.9772;群体和单细胞水平的光谱数据均表明,吲哚可剂量依赖性地抑制葡萄球菌黄 素的合成,色素含量降低幅度超过70%;在分批培养中细菌色素含量在对数生长中期(12 h)达到最大值,各 个时间点的群体内部细胞间色素含量的异质性较小,RSD在39.2% ~61.1%之间。 本研究表明光镊拉曼光 谱技术是一种在单细胞水平分析葡萄球菌黄素含量的可靠方法。 关键词摇 单细胞分析;光镊拉曼光谱;金黄色葡萄球菌;葡萄球菌黄素 1摇 引摇 言 由于生物群体细胞常存在不均一性,传统的基于群体平均值的分析方法可能掩盖个体细胞携带的 信息。 为了揭示群体中个体细胞之间的差异,更深入地理解细胞的生理或病理过程,需要准确测定单细 胞内化学组分的含量,因此单细胞分析技术成为当前分析化学中一个相当活跃的研究领域。 目前,较为 常见的单细胞分析手段包括流式细胞术、显微镜技术、毛细管电泳、单细胞拉曼光谱等[1~3]。 光镊拉曼 光谱技术(Laser tweezers Raman spectroscopy,LTRS)将光镊技术和拉曼光谱技术结合起来,利用高度汇 聚的激光束,囚禁溶液中的活细胞,再通过瞬时加大囚禁细胞的光束激发细胞内分子的拉曼散射[4~7]。 该技术充分结合了共焦显微、光镊、拉曼光谱的优点,提高了检测的灵敏度、准确度,是研究生理状态下 2+ 单个活细胞内化学物质含量及结构变化的有力工具。 目前,LTRS技术已被应用于研究Ca 诱导下线粒 [8] [9] [10] 体内分子的变化 ,红酵母类胡萝 卜素含量的测定 ,体内血糖浓度的检测 ,以及微血管内单个红细 [11] 胞的表征 等。