2015年版《中国药典》肝素标准增修订情况及建议 李京1，王悦1 .doc

2015年版《中国药典》肝素标准增修订情况及建议 李京1，王悦1，宋玉娟1，范慧红1，张筱红2*（1.中国食品药品检定研究院，北京 100050；2.国家药典委员会，北京 100061） 中图分类号 文献标识码 文章编号肝素作为临床用量最大的抗凝血药物，广泛收载于各国药典。2008年1月，美国百特公司生产的肝素钠注射液在美引起严重不良反应，肝素的质量及质量标准问题引起了全球范围的关注[]。我国政府对此高度重视，于2009–2010年连续两年对肝素钠注射液进行全国评价性抽验，抽验结果表明目前我国市场上的肝素钠注射液质量情况较好，绝大多数样品符合标准规定；抽验也发现肝素法定标准20年未做过大的修订，标准中缺乏对杂质的控制，部分检验项目限度较低[]。中检院通过研究建立并完善了多个检验方法，包括肝素的有关物质、分子量与分子量分布、单糖组成、结合和游离硫酸根、防腐剂的使用、抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性、核酸和蛋白残留、有机溶剂残留等。2010年版《中国药典》 2010年版《中国药典》肝素钠标准[]进行了大幅提高，对多个项目进行了增修订，特别注意对有关物质等的控制，建立了肝素、硫酸软骨素、多硫酸软骨素鉴别用国家对照品2010年版药典第一增补本中新增了肝素钙和肝素钙注射液[]两个品种。我国肝素类产品的检验检测水平日益提高，曾多次参与国际协作研究，主要包括第六次肝素国际对照品协作标定（2009年）[-6]，美国药典肝素分子量对照品协作标定[7-8]、核酸及蛋白残留检测方法协作研究（2012年）[-10]，我国在肝素类产品质量控制方面已经赢得了国际话语权。《药典》USP）37版 [11]主要增加分子量与分子量分布、核酸及蛋白检测新方法、修订了有关物质检查项；《药典》EP）8.3版[12]主要修订了肝素的来源、有关物质检查、肝素的效价测定方法等；《药》JP）16版[13]也增加了一些杂质检查项。 1.5 征求意见 标准修订前，中检院征集了全部肝素生产企业的意见，收到4个企业的书面回复，包括：河北常山生化药业股份有限公司，常州千红生化制药股份有限公司 2.1 前言 将肝素的来源由“猪或牛”修改为“猪”来源。肝素存在于哺乳动物的多种组织中，多从牛肺或牛、猪、羊肠粘膜中提取得到，来自不同组织的肝素，其理化特性和药理作用有所不同[1，14-16]。《中国药典》。 将肝素效价由“每1mg的效价不得少于170单位”修改为“每1mg的抗Ⅱa因子效价不得少于180 IU”。随着肝素提取纯化工艺的进步，肝素的抗凝效价越来越高[15]，《中国药典》1mg的效价不得少于100单位”， 1977年版、1985年版、1990年版的限度为“每1mg的效价不得少于140单位”，1995年版、2000年版、2005年版的限度为“每1mg的效价不得少于150单位”，2010年版的限度为“每1mg的效价不得少于170单位”。《中国药典》201年版，增加“保留时间相对偏差不得过5.0%”，删除“必要时，可将供试品溶液与对照品溶液等量混匀，用水稀释一倍，制成混合溶液。混合溶液应现单一主峰”。肝素在离子色谱中的色谱峰为宽分布的“馒头峰”，我们在评价抽验中收集目前市场上的肝素原料，供试品与对照品峰保留时间的相对偏差小于5.0%，如大于5.0%，则说明供试品的结构或分子量与对照品有较大差异。 图1 2015年版《中国药典》肝素钠有关物质检查系统适用性试验对照品溶液（3）色谱图（肝素10 mg?mL-1，硫酸皮肤素0.2 mg?mL-1，多硫酸软骨素0.2 mg?mL-1） 2.4 检查 2.4.1 酸碱度 将pH值限度由“5.0~7.5”修订为“5.0~8.0”，与EP8.3一致。肝素为硫酸化多糖，酸碱度过低，易造成肝素的降解，因此修改pH值限度。 2.4.2 核酸 将原来的吸光度检查项修改为核酸，检查核酸特征吸收波长260nm处吸光度，限度不变，仍为“不得过0.10”。 USP37新的核酸测定方法为酶解液相法，美国药典委员会于2011年组织了肝素原料中核苷酸杂质的国际协作研究，全球13个实验室提供162批肝素钠原料核酸测定数据，研究确定了最终的实验方法及限度，中检院参加了协作研究[9]。该方法将样品用核酸酶、碱性磷酸酶、磷酸二酯酶I 37℃下水解1h，将样品中的核酸经酶解成核苷后，采用反相色谱分离。 酶解液相法灵敏专属，但操作繁复，实验成本高；吸光度法的专属性不好，但方法简单，易于操作。中检院对多批国产肝素钠核酸进行测定，吸光度符合《中国药典》规定的样品也符合USP 37的规定。EP 8.3中也仍使用吸光度法控制核酸残留，我国的标准限度略严于EP8.3（不得过0.15）。 2.4.3 蛋白质 增加福林酚法（Lowry法）