半微量全血培养法制备罗非鱼染色体标本的条件探索 - 上海海洋大学学报.pdf

上海水产大学学报 第 14 卷第4 期 Vol. l4 , No .4 JOURNAL OF SHANGHAI FISHERIES UNlVERSITY 2∞5 年 12 月 Dec. , 2∞5 1 文章编号: 1∞4 -7271(2 5)04 - 0457 - 03 ∞ .研究简报· 半微量全血培养法制备罗非鱼 染色体标本的条件探索 The research for the half- micro blood lymphocytic cell cultivation of the preparation of chromosome of tilapia 曹丽萍，丁炜东 (中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，江苏无锡 214081 ) CAO Li-ping , DING Wei-dong (Freshwater Fi自heries R，田earch Cerúer , Chinese Academy 0/ Fishery Science , Wuxi 214081 , Chioo) 关键词:细胞培养;罗非鱼;染色体 Key words: cell cultivation; tilapia; chromosome 中图分类号:S 917 文献标识码:A 鱼类染色体的制作方法最常用的是 PHA 体内培养肾细胞制片法，对野外没有良好设备的情况，此 法尤为适用，但这种方法要求剖杀鱼，不利于鱼种的保存，尤其是对稀有鱼类和种鱼不太合适。因此建 立一种一般实验室能够开展的方便稳定的染色体制片方法势在必行。大量研究证实采用鱼类外周血淋 巴细胞培养制备染色体的方法能有效地解决这些问题[1 ， 2] 。本研究以罗非鱼为材料，对鱼类外周血淋 巴细胞培养条件进行了探索，初步建立了能够制备优质染色体制片的方法，为进一步研究染色体的结 构、基因定位、荧光原位杂交等奠定了基础。 1 材料和方法 1. 1 材料 RPMI1640 全培养基[RPMI 1640 培养基，20% 胎牛血清，0.5% 青霉素-链霉素(10 ∞o U/rnL) , P旧]，试验鱼由元锡淡水渔业研究中心试验场提供。 1.2 方法 1.2.1 采血及血液保存时间 1 rnL注射器吸取少量 500 U/rnL肝素铀溶液润温管壁，试验鱼用酒精棉球消毒尾部体表后，在侧线 鳞处采 2 rnL血液，排掉最初的 1-2 滴血液，每 3 rnL全培养基中注人 3-4 滴血液，轻轻摇匀后盖好盖， 置于 30 c ,5% CO 培养箱中，培养72~96h[3] ，剩余的血液置于4 C冰箱中，分别于 1 d 5 d ,lO d 后进 2 , 行细胞培养。 收稿日期 :2 5-04-19 ∞ 基金项目:国家自然科学基金项目(3 0371116) 作者简介:曹丽萍(1