蛋氨酸对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞器蛋白质组学影响.pdfVIP

摘要 摘 要 乳产量和乳蛋白含量低一直是制约着我国奶牛业发展的重要因素，深入研究泌乳调控机 理对奶牛养殖业具有重要的应用价值和现实意义。蛋氨酸是乳蛋白合成的重要前体物质，以 往的研究主要侧重于蛋氨酸对奶牛生产性能的影响，而关于蛋氨酸对体外培养的奶牛乳腺上 皮细胞的泌乳调控作用研究较少。研究蛋氨酸与乳蛋白合成及乳腺泌乳能力的关系，寻找奶 牛乳腺上皮细胞亚细胞结构中与泌乳相关的重要蛋白质，将有助于从蛋白质水平揭示乳蛋白 合成的调控机制。 本研究成功构建体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型，添加不同浓度的蛋氨酸后，采用高 检测蛋氨酸对B．酪蛋白mRNA表达水平的影响，应用细胞活力分析仪(CASY)来检测乳腺上 皮细胞增殖及活力的变化，甘油三酯试剂盒检测甘油三酯含量，确定蛋氨酸的最佳添加浓度， 并进一步应用双向电泳技术分析体外培养的蛋氨酸处理组与对照组奶牛乳腺上皮细胞亚细胞 Maser 结构蛋白质组。利用Image 2D软件对图谱进行对比分析，通过质谱(MALDI．TOF．MS) 鉴定这些差异表达的蛋白质。 主要研究结果如下： 时间为24h时，蛋氨酸在1．2mmol／L时对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞增殖的促进作用最明 显俨0．01)，是体外培养的奶牛乳腺上皮细胞的最佳添加浓度。 (2)利用双向电泳技术建立了对照组和蛋氨酸处理组的奶牛乳腺上皮细胞亚细胞结构 蛋白质图谱，获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。筛选出了对照组和蛋氨酸处理组 Maser2D软件对图谱进行对比分析，质 的差异表达蛋白质点并进行了质谱鉴定。利用Image 谱鉴定和数据库检索，成功鉴定出5个在蛋氨酸处理组表达上调的蛋白质，分别是Carnitine 2、Omithine acetyltransferase、Dihydropyrimidinase—relatedprotein A-I·binding dehydrogenase[ubiquinone】flavoprotein2及Apolipoproteinprotein，这些差异蛋白 质点的功能涉及氨基酸转运、能量代谢及细胞骨架构成等生物学功能。 高泌乳水平奶牛乳腺组织中表达量最高，低泌乳水平奶牛次之，干奶期奶牛乳腺组织中表达 量最低。以上差异点的发现为研究奶牛泌乳机理提供了有益的线索。 综上，蛋氨酸能显著促进奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成相关基因的表达及蛋白质组的变 化，揭示蛋氨酸在奶牛泌乳调控中发挥重要作用，为深入研究奶牛泌乳调控机制提供了实验 依据，为后续相关研究奠定了基础。 关键词：奶牛；乳腺上皮细胞；亚细胞器；蛋氨酸：双向电泳；蛋白质组 Abstract Abstract Lowmilk andmilk contenthavebeen yield protein the ofChinese restrictingdevelopment dairy oflactation mechanismon COWShave industry,studyregulation dairy boththeoreticaland isan practicalsignificance．Methionine ofmilk importantprecursorproteinsynthesis，previous studies focusedonthe ofmethionineon mainly impact the