延迟性上调Smad7对大鼠腹膜纤维化模型腹膜炎症的影响.pdfVIP

摘 要 延迟性上调Smad7对大鼠腹膜纤维化模型 腹膜炎症的影响 摘 要 腹膜透析是终末期肾病的三大替代治疗之一，其具有方便，有效，相对 廉价等优点．且可以更好地保护残肾功能，中分子物质清除效果好，透析头 3-5年病人生存率及生存质量高等。随着腹透管路连接系统的改进，腹透时 并发细菌性腹膜炎已明显减少，长期维持性腹膜透析患者腹膜超滤功能和转 运功能的障碍是制约腹膜透析发展的主要原因。已有的研究表明，含葡萄糖 非生理性腹透液、低PH值、反复发生的腹膜炎是导致腹膜结构和功能受损 的主要因素，最终导致腹膜纤维化和腹膜功能的减退，到目前为止，临床上 尚无有效方法防治长期透析导致的腹膜纤维化。 纤维化是过度的组织修复过程，其最显著的特征是纤维母细胞的增生 和细胞外基质的过度沉积。间皮细胞的间叶转分化是纤维母细胞的来源之 一。EMT是腹膜纤维化的重要机制。TGF_13是已知的最主要的致纤维化的细 胞因子。它对ECM的作用包括：刺激ECM蛋白的生成和积聚；降低蛋白酶 的生成而减少基质降解；增加蛋白酶抑制物和刺激ECM蛋白受体合成。TGF— 合，从而对抗TGF-B的作用。有研究证实Smads信号通路的激活与I型胶 1引起的胶原I与胶 原启动子转录活性有关，Smads蛋白直接参与了TGF-B 原Ⅳ的转录调控。 由于非生理性腹透液中的高糖成份及其降解产物、低PH值、尿毒症 毒素及腹透管等因素对腹膜的影响，无论有无细菌感染，CAPD可使腹膜产 生慢性炎症，腹膜炎症是腹膜纤维化的特征之一。IL-1等炎症因子可刺激 纤维母细胞增殖；可通过使细胞外基质产生增多，降解减少致ECM聚积。 EG IL-1或TNF亦可引起腹膜间皮细胞VF的表达增加，后者可引起腹膜 新生血管的形成。 摘 要 TG卜B是一个多效能的细胞因子，其具有参与纤维化、抗炎作用、调 号通路的负反馈调节主要成员，余学清等研究证实Smad7质粒转染入大鼠 腹膜，可抑制高糖及LPS所致的大鼠腹膜纤维化，提示Smad7对腹膜纤维 化具有潜在的治疗作用。另有研究证实腹膜组织Smad7的上调表达显著增 信号通路中负性调控因子，在抑制了腹膜纤维化的同时，是否会同时抑制 TGF-8的抗炎作用，而加重腹膜炎症?因此，本研究的目的是探讨上调Smad7 对大鼠腹膜纤维化模型腹膜炎症是否有治疗作用。 本研究的主要内容包括： (1)对大鼠腹膜纤维化模型超声微泡转染Smad7质粒的转染效率的检 测。 (2)延迟性上调Smad7对大鼠腹膜纤维化模型腹膜炎症的影响。 一、超声微泡转基因技术转染效率的检测 目的：利用超声微泡技术转染Smad7质粒于腹膜组织，为进一步观察Smad7 11 作用提供技术平台。方法：(1)将Smad7质粒用生理盐水稀释为100g／ml， 每支发泡剂(含59mg六氟化硫)用5ml生理盐水稀释，二者以体积比1： 1混匀，分别以4ml、5ml、6ml注射入腹腔，并体外超声，通过荧光直接观 察腹腔内液体注射量对转染效率的影响。(2)将Smad7质粒用生理盐水稀 释，发泡剂一支用5ml生理盐水溶解，二者以体积比l：1充分混匀，Smad7 II u 终浓度为100pg／mi、150 g／ml、200g／ml，根据前一个实验我们选择每 只大鼠腹腔注射体积为6ml，并体外超声，观察注射浓度对转染效率的影响。 Smad7质粒转染大鼠腹膜，并于转染后第3、7、14、21、28天杀检动物。 (4)分别于大鼠腹膜纤维化模型的第15天和第29天两次转染Smad7质粒， 并于转染后第3、7、lO、17、2l、28天杀检动物。结果：(1)腹腔内注 ix 射6ml，浓度200 质粒于转染一次，Smad7蛋白水平在转染后第14天时开始明显下降。(3) 分别于大鼠腹膜纤维化