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肌苷生物合成途径关键酶——谷氨酰胺磷酸 核糖焦磷酸转酰胺酶的研究进展 徐咏全 刘 辉武改红 陈 宁 (天津科技大学食品科学与生物工程学院天津300222) 摘要肌苷属于嘌呤核苷，是食品和医药行业广泛应用的重要产品。谷氨酰胺磷酸核 糖焦磷酸转酰胺酶在肌苷的生物合成途径中起重要调节作用，对其深入研究将有助于提高 肌苷的产量，对工业化生产有重大意义。谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶是生物体内嘌 呤产物合成途径的关键酶，负责催化全合成途径的第一步反应。本文从谷氨酰胺磷酸核糖 焦磷酸转酰胺酶的属性、功能、结构和调控方面对其做了介绍，为肌苷产量的提高工作奠定 了基础。 关键词肌苷，谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶，嘌呤全合成途径 肌苷又称次黄嘌呤核苷，是在食品和医药行业广泛应用的重要的化学物质。 它是食品助鲜剂一肌苷酸的前体物，又是治疗多种疾病，如心血管病，肝脏病和 造血机能障碍等疾病的良好药物[1J，并且是新型抗病毒药物抗病毒药，如病毒 唑、无环鸟苷、异丙肌苷及2’，3’．双脱氧肌苷等的前体物质[2]。由于嘌呤产物的 用途广、市场需求量大，故工业生产中迫切要求提高其产量。 构建肌苷高产菌株是提高产量的一种重要手段，而构建高产菌可通过基因 工程方法对生产菌进行改造，增强所需代谢流的酶活性，达到提高产物生成量的 目的。因此对其代谢途径中的关键酶的性质的研究有重要的意义。本文对嘌呤 产物全合成途径中第一步反应的关键酶一谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶 的最新研究进行了综述，主要从该酶的属性、功能、结构和测定方面对其做了介 绍，为基因操作技术奠定了基础。 1谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶的属性与功能 谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶(Glutamine Amidotransferase，GPATase；EC 的产物[3]3。该酶既属于谷氨酰胺转酰胺酶类，又属于磷酸核糖转移酶类。谷氨 · · S7 酰胺转酰胺酶(GATaSes)是可将谷氨酰胺的氨基氮转移至不同底物上的一种酶 类。大部分的GAT鹊e可利用氨(N-13)做为替代的氮源。谷氨酰胺结合位点与依 赖于氨的合成位点分别处在不同的结构域(有的位于不同的亚基)，分别称为“谷 和代谢有关的一类酶。该类酶催化磷酸核糖焦磷酸(PRPP)中核糖c1位置上的 酶专一性的胺为底物的反应【7|。 novo PfuPP转酰胺酶负责催化嘌呤核苷全合成途径(de pathway)的第一步反 应，而且是该途径的关键酶…8。它是一种复合酶，因为它催化以下的两个反 应一j。N．末端谷氨酰胺酶结构域催化前一个反应而C．末端的PRlke催化后一 个反应[1o|。 (N一末端催化的反应) Gln+H20—Glu+NIt3 NHs+PRPP—PRA+PPi(C一末端催化的反应) (总反应) Gin+PRPP+H20—PRA+PN+Glu 2谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶的结构 现在有18种原核生物和真核生物的唧转酰胺酶序列已测定。它们按照 有无4Fe4S簇分为两类。其中枯草芽孢杆菌与鸟类、人类细胞中的PRPP转酰 簇配位的四个保守的半胱氨酸残基，而大肠杆菌中唧转酰胺酶不含这些基 指出，嘌呤产物全合成途径部分由该酶的有氧钝化的特性所调控。在氧气存在 下，4Fe4S簇被解体而且酶蛋白变性从而使酶失活[14]。大肠杆菌中的同源酶 且在体外对氧气不敏感【5J5。 唧转酰胺酶具有一种轮胎形的结构，大小约为105×95×55k。它由相同 的四聚体亚基组成。每个亚基具有大致相同的尺寸但不同的折叠(如图l所 在pH7．0时带电荷．6．911。每个亚基包括465个