蓝藻基因工程应用研究进展.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（３）：１０５１１１ ? 蓝藻基因工程应用研究进展 １ １ ２，３ 席　超 　王春梅 　施定基 （１北京中医药大学中药学院生物制药系　北京　１００１０２　２天津科技大学海洋科学与工程学院　天津　３００４５０） （３中国科学院植物研究所　北京　１０００９３） 摘要　作为新的基因工程表达宿主，蓝藻以其独特的优势正逐渐引起人们的关注，自２０世纪９０ 年代以来，蓝藻已经形成了一套稳定的基因转化体系，２０多年来已有３０多种外源基因在蓝藻中 表达成功。蓝藻表达系统将来有希望在制备重组药物、治理环境污染、农药生产等方面得到广泛 应用。对蓝藻基因工程的发展及其在医药、环保、农业、生物传感器等方面的应用研究作一综述。 最后分析了蓝藻基因工程发展的瓶颈表达效率低的问题，总结了研究者所作的努力：基因和剂型 的选择、转录翻译元件的调控、宿主生理状态的调控等。 关键词　蓝藻　基因工程　表达系统 中图分类号　Ｑ７８ 　　蓝藻又名蓝细菌，是一类光合自养的原核生物。 和基因工程研究中的重要模式生物［１］。目前，蓝藻基 它结构简单、生长迅速、适应性强、易于进行遗传操作， 因工程主要研究的内容包括基因的选择、鉴定、测序、 并且多数不含毒蛋白，可作为很好的基因工程受体系 序列分析与克隆，载体的构建，调控表达原件的分析， ［１］ 统 。作为基因工程受体，与大肠杆菌相比其表达产 基因转化系统的发现和筛选，转基因蓝藻的筛选及培 物不形成包涵体，容易纯化；不含毒素，比较安全；培养 养条件的优化等。 基为无机盐，廉价不易污染。由于优势明显，蓝藻正成 　　目前已见报道的蓝藻基因转移系统主要可分为两 ［２］ 为继大肠杆菌和酵母之后的新一代转外源基因的微生 类 ：一类是遗传转化，包括自然转化、诱导转化、电击 物表达宿主，受到了广泛的重视。自２０世纪９０年代以 转化。自然转化如聚球藻ＰＣＣ７００２、ＰＣＣ７９４２和集胞 来，蓝藻已经形成了一套稳定的基因转化体系，２０多年 藻ＰＣＣ６８０３等，具有自然吸收外源ＤＮＡ的能力，然而 来已有３０多种外源基因在蓝藻中表达成功。蓝藻表 到目前为止自然转化的机制尚不清楚。诱导转化是利 达系统将来有希望在制备重组药物、治理环境污染、农 用溶菌酶、 ２＋ Ｃａ 诱导细胞感受态，或利用溶菌酶 ＥＤＴＡ 药生产等方面得到广泛应用。 处理产生原生质球用于蓝藻转化。自从 １９８９年Ｔｈｉｅｌ 等首次通过电击转化成功地把穿梭表达载体 ｐＲＬ６转 １　蓝藻基因工程研究简述 入鱼腥藻Ｍ１３１以来，已有一批穿梭表达质粒通过电击 　　蓝藻是藻类中最早能稳定地表达外源基因的种 在多种蓝藻中转化成功。除了遗传转化另一类便是接 类。从１９７０年发现蓝藻可以转化，１９７３年证明蓝藻中 合转移，接合转移是目前蓝藻基因转移系统中使用最 含有质粒，１９８１年首次在蓝藻中表达外源基因成功，到 为普遍的一种方法。它操作较为简单，适用于大多数 ［３］ １９９６年聚胞藻ＰＣＣ６８０３作为第一个光合生物完成了 的单细胞、丝状蓝藻 。从Ｗｏｌｋ首创鱼腥藻接合转移 基因组全序列测定，蓝藻的研究一