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6呼吸酶的简易测定法
中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告
2015年11月号
课程: 植物生理学实验 题目:呼吸酶的简易测定法
一、实验目的
学习植物呼吸酶的定性鉴定方法 ,了解呼吸酶在植物呼吸代谢中的作用。
二、实验原理
呼吸作用是一系列的氧化还原作用,其中间步骤是靠各种氧化酶和还原酶促进的,根据它们氧化还原反应的特性和特殊的底物或受氢体,于反应后能产生特定的颜色,从而辨别呼吸酶的存在。
三、仪器试剂
1.仪器及用品
培养箱,试管,试管架,移液管,研钵,纱布,漏斗,胶头滴管
2.试剂
(1)3%H2O2
(2)0.025%甲烯兰
(3)液体石蜡
(4)1.5%邻苯二酚
四、实验材料
马铃薯,白菜
五、实验步骤
1.去氢酶
取马铃薯块茎去皮后,切成10块5mm见方的小块,分成两组,分别放进两个试管中,每个试管中各加5mL0.025%甲烯兰溶液,其中一组煮沸10分钟,然后在液面上各加一薄层液体石蜡,以阻止空气进入甲烯兰溶液中。
将试管放入25℃的培养箱中,一天后观察试管内溶液及马铃薯小块颜色的变化,未煮沸试管内甲烯兰溶液会变成无色。然后把试管内液面上的石蜡油吸去,取出管内的马铃薯小块放在纸上暴露于空气中再观察颜色的变化,并说明变化的原因。
2.氧化酶
取马铃薯5g 剪碎放入研钵中,加蒸馏水少许研碎,再加入蒸馏水约15ml混匀,用纱布过滤到一个小烧杯中备用。取两个试管,分别加3ml 上述滤液,其中一个试管先煮沸数分钟,然后各加10 滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液,观察有何现象,如溶液产生褐色、红色、紫色或蓝色,则表示邻苯二酚已经被氧化,氧化程度不同,则产生不同的颜色。用白菜重复上述步骤。
3.过氧化物酶
分别取白菜的滤液3ml加到两个试管中,其中一个试管先煮沸数分钟,然后各加10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液和5ml 3%的H2O2的溶液,如有褐色或蓝色产生,即表示过氧化物酶的存在。
4.过氧化氢酶:
取马铃薯块茎去皮,切四块5mm 见方的小块,分为两组,其中一组煮沸10 分钟,然后分别加到盛有5m1 3% H2O2的试管中,观察有什么变化?并加以说明。
六、实验结果及分析
1、去氢酶
实验结果:左边是白菜,右边是马铃薯。实验组溶液均变为褐色,说明白菜和马铃薯细胞中都有氧化酶,且马铃薯中氧化酶的含量和活性高。
3、过氧化物酶
实验结果:左边为未煮沸的试管,右边为煮沸的试管。未煮沸的试管中产生大量气泡,而煮沸的试管中几乎没有气泡。
原因:因为马铃薯种含有过氧化氢酶,可以将H2O2快速分解产生大量O2,而煮沸的试管中,马铃薯中的过氧化氢酶因高温而失活,无法分解H2O2,只有H2O2自身缓慢分解,产生少量气泡。
七、思考题
1、如果植物体含有氧化酶如何鉴定其是否含有过氧化物酶?
往得到的植物液中加10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液,观察反应现象。如果溶液颜色比较深,说明其可能含有过氧化物酶。再往溶液中加5ml3%的过氧化氢溶液,观察现象。如果有大量气泡冒出,这可说明其中含有过氧化物酶。
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