蒸发光散射检测器在糖类分析中的应用论文.pdfVIP

蒸发光散射检测器在糖类分析中的应用 陈琴鸣 (丽水市食品药品检验所丽水323000) 蒸发光散射检测器(EvaporativeLight-Scattering 具有可测定无紫外吸收的化合物、可进行梯度洗脱等特点，弥补了紫外检测器(UVD)和示差折光检测器 (RID)的不足，在分析领域应用十分广泛。在我国自2001年首次在黄芪注射液质量标准中应用以后， 其在药品质量控制及药物分析中的应用得到了快速的发展， ‘中国药典》2005年版“附录VD高效液相色 谱法”中检测器收载了ELSD，更促进了其在药物分析中的应用。但就质量标准及近年文献来看，在糖类分 析中还是不多。糖类特别是多糖由于其结构的特殊性，对其结构分析、质量控制一直是个问题，ELSD的 应用无疑给糖类的分析开辟了新的思路。本文就ELSD在糖类分析中的应用进行介绍。 1单糖、低聚糖的含量测定 近年来，国内发表了不少HPLC-ELSD法测定单糖的研究论文，其应用领域主要有中药材及提取物中 单糖成分的测定、食品及饮料中单糖的测定，含单糖成分特别是葡萄糖的化学药制剂中的含量测定，烟草 中单糖成分的含量测定，此外，在杂质分析、尿液及药物合成过程控制中单糖测定也有报道。这些文献的 测定条件详见表一[1-173。 一 … 由于缺乏发色基团，HPLC法测定糖类时对检测器有严格的要求，过去多采用RID或低波长的UV检 测器(195-205rim)。RID的低灵敏度和不能进行梯度洗脱使得其在糖类测定中不甚理想，而低波长UV检 测也是低灵敏度，因而对流动相的选择要求十分严格。由于这两种技术均基于溶剂的光学特殊变化，因此 常会遇到基线漂移，并需长时间的平衡。 由于ELSD的工作原理是其流动相在检测前蒸发，对流动相光学特征和组成的改变不受影响，因而克 由于糖类的强极性，能在氨基键合相柱中保留，氨基键合相柱对多糖的分离能力极强，因而广泛应用， 但由于其键合相的化学降解导致了耐用性差，用一段时间后就会出现保留能力降低、峰形差等柱效降低的 情况，甚至损坏。在使用ELSD和MS检测器时，此问题更为明显，因为这些检测器对非挥发性键合相的 损失、导致基线噪音或基线漂移。此外，如不使用升高柱温，许多氨基键合相柱对一些还原糖还会形成很 差的峰形并产生双峰。 离子交换色谱柱和分子排阻色谱柱也常用于糖类的分离。离子交换色谱柱必须采用水为流动相，且不 能进行梯度洗脱，一般来说要求提高温度和低的流速才能进行分离测定。同时色谱柱易于受样品中金属的 污染。树脂为固定相的分子排阻色谱柱则受到其对低聚糖的溶解能力的限制，并形成十分差的峰。 相比之下，Carbohydrate柱在分析糖类中效果较好，Alltech118】公司在其网站公布了用Prevail CarbohydrateES柱梯度洗脱分析了葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖等10多种糖类物质，并与氨基键合相柱进 行了比较。同时，还提供了用Prevail ES柱、ELSD检测在分析蔬菜果汁中果糖、葡萄糖、 Carbohydrate 蔗糖，糖酒中赤藓醇、木糖醇、甘露醇、麦芽糖醇，以及其它食品中的糖或醇类的HPLC-ELSD图谱，均 用乙腈一水梯度洗脱，分离效果良好。 高效液相色谱法分析糖类化合物所用流动相一般为水和乙腈的二元混合溶液，流动相配比视分离组分 的多少，分子量范围i结构组成等不同而定，如测定成分较多，可采用梯度洗脱改善分离、缩短分析时间。 但无论流动相配比如何变化，采用反相化学键合相色谱体系分析单糖、低级糖．其出峰顺序有规律地依赖 于分子量的大小，且相同分子量的酮糖较醛糖保留时间短。 Rafael Lucena等【l卅采用在线自动分析器(Multiparametric 154 多种不同饮料中的总糖、咖啡因及色素的含量。 杨蕾等【20】对国外参考标准品传递测定和新建的两种检测器测定方法进行对比；通过C18色谱柱反相分 离，用DAD检测、ELSD检测分别测定阿卡波糖及其相关物质的含量。给对照品的标定提供了一种新的 途径。 值得注意的是，在用ELSD测定单糖含量时，由于易发生单糖的转化，柱温对测定结果有较大的