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两种分离人胎盘间充质干细胞方法的比较
中国医科大学学报 第39 卷 第8 期 2010 年8 月
675
Journal of China Medical University Vol.39 No.8 Aug. 2010 · ·
两种分离人胎盘间充质干细胞方法的比较
Comparison of Two Methods in the Isolation of Human Placenta-derived Mesenchymal Stem Cells
1 2 3
李昆,于艳秋,李世正
(1. 辽宁医学院 附属第一医院检验科,辽宁 锦州 121001;2. 中国医科大学 基础医学院病理生理教研室,沈
附属第一医院普外科,辽宁锦州121001)
摘要:寻找简便易行的人胎盘间充质干细胞(hPDMSCs)的提取方法。
关键词:胎盘间充质干细胞;组织块培养法;酶消化法
中图分类号:R329 文献标志码:B 文章编号:0258-4646 (2010)08-0675-02
近年来,人们已成功从骨髓、外周血、肌肉、脂肪及胎盘 1.2.2 不同方法分离的hPDMSCs的传代培养:取上述两种
3 2
等组织中分离并鉴定出间充质干细胞(mesenchymalstem方法分离培养的hPDMSCs以每孔5×10个/cm的密度接
cells,MSCs)。其中,hPDMSCs不仅来源广泛,且对其研究不会种于24孔板中。采用胰酶消化台盼蓝染色法,每日取4孔计
涉及伦理道德和法律问题,因此成为寻找人类间充质干细胞 数细胞,绘制细胞生长曲线,细胞达到生长抑制时停止实验。
新来源及提高临床应用效果的研究热点。 目前,hPDMSCs的1.2.3 不同方法分离的hPDMSCs细胞生物学特性的比较
原代培养大多采用常规的酶消化法,但其存在着操作过程繁 流式细胞仪检测细胞表面标记特征:取上述两种方
琐、由于操作过程繁琐致污染机率增加、长时间酶的消化对 法分离培养的细胞进行扩增。扩增至第2代时,流式细胞仪
细胞损伤较大及成本高等弊端。本实验采用组织块培养法, 检测细胞表面CD13、CD14、CD29、CD31、CD44、CD45、CD73、
与常规的酶消化法进行比较,以求得最佳的hPDMSCs原代CD105、HLA-ABC及HLA-DR。
培养方法。 流式细胞仪检测细胞周期:取上述两种方法分离培
养的细胞进行扩增。扩增至第2代时,流式细胞仪检测细胞
1 材料与方法
周期。
1.1 材料 1.2.4 统计学分析
2
1.1.1 标本来源:经产妇同意后,无菌条件下剖宫产的足月 用SPSS10.0统计学软件处理,做χ 检验,P<0.05为
健康新生儿胎盘组织(来源于辽宁医学院附属第一医院产 差异有显著性。
科).
2 结果
1.1.2 试剂:DMEM,FBS,非必需氨基酸-谷氨酰胺,青链霉,L
素,β-巯基乙醇,鼠抗人FITC直标单克隆抗体CD29、CD31、 2.1 酶消化法
CD34,鼠血清,PBS。 培养3d左右仅见少量单个贴壁细胞,呈圆形或短梭形,
1.2 方法 培养10d左右,细胞形态逐渐伸展开来,呈长梭形,类似成纤
1.2.1 hPDMSCs的原代培养 维细胞,并逐渐形成漩涡状的集落
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