广州医科大学《临床免疫学检验》26免疫检验的自动化分析仪器.pptVIP

* 本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平，操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(RF)可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。 吖啶酯标记化学发光免疫测定示意图 ALBORT I2000 电化学发光免疫分析仪 三联吡啶钌标记，三丙胺为电子供体（发光稳定，持续时间长） 生物素放大技术 磁性微粒子分离技术 电化学发光原理 底物：三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3] N羟基琥珀酰胺酯(NHS) 三丙胺(TPA) 在电极阳极表面，以上两种电化学活性物质同时失去电子发生氧化反应，2价的[Ru(bpy)2+3] 标记物被氧化成3价的[Ru(bpy)3+3] 的标记物，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+* ， TPA+* 很不稳定，自发地失去一个质子而形成自由基TPA* ，其为强还原剂，将一个电子给3价的[Ru(bpy)3+3] ，使其成为激发态的Ru(bpy)2+3 ，而TPA自身被氧化成氧化产物。激发态的Ru(bpy)2+3衰减时发射一个波长620nm的光子，重新形成基态的Ru(bpy)2+3 。这一过程在电极表面周而复始进行，产生许多光子。使得光信号增强。 电化学发光免疫测定示意图 电化学发光免疫测定工作示意图 酶联发光免疫分析仪特点 测定过程与ELISA相似，不同在于最后一步酶反应的底物改为发光剂，测定的仪器为光信号检测仪，固相载体为磁珠或塑料锥形小管。 酶标记抗原或抗体结合稳定 酶催化的发光反应稳定，持续时间长，便于记录和测定。 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫测定示意图 三类型仪器的对比 仪器 标记物质 发光类型 发光特点 I2000 吖啶酯 直接化学发光 发光迅速、强度大、时间短、反应简单、干扰物质少、背景噪声低。 E170 三联吡啶钌 电化学发光 三丙胺为电子供体，发光稳定，持续时间长。 DXI800 碱性磷酸酶 酶促发光 酶催化的发光反应稳定，持续时间长，便于记录和测定。 时间分辨荧光免疫测定（time resolved fluorescence immunoassay, TRFIA）是以镧系元素标记抗原或抗体作为示踪物，并与时间分辨测定技术相结合，建立起来的一种新型非放射性微量分析技术，具有灵敏度高，镧系元素发光稳定，荧光寿命长，不受样品自然荧光干扰，标准曲线范围宽等特点，已在临床实验室广泛使用。 　一、时间分辨荧光免疫分析仪 ■荧光寿命长：10～1000μs，时间差---时间分辨 ■ Stokes位移大：270nm，易分辨 ■发射光谱带很窄：波长613±10nm，降低本底 ■荧光标记物的相对比活性高。（激发光源为脉冲氙灯，1000次/秒） ■信号增强 ■激发光谱带较宽：波长300～350nm，提高灵敏度 镧系元素（Eu3＋、Tb3＋）： （一）基本原理 时间分辨荧光法检测原理 　1. TRFIA分析用的酸性增强液易受环境、试剂、容器等里面的镧系元素污染，使本底升高，所用试剂和器材应尽量防尘。 　2.TRFIA分析用载体最常用的是聚苯乙烯微96孔板，其荧光本底低，并有洗涤微孔板的自动装置，但不同厂家生产的微孔板，所产生的荧光有很大差异。 （二）注意事项 全自动酶联免疫分析系统 分为二类：一类为连体机。连体机是由多个模块组成，使用一台计算机、一套操作系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加试剂、再孵育、洗涤、读数和结果打印全自动进行。 一类为分体机， “前处理系统”（全自动样本处理工作站）＋“后处理系统”（全自动酶免分析仪）。  全自动酶联免疫分析系统构成 前处理 条形码识别系统 样本架和加样系统 试剂架等结构 后处理 温育系统 液路系统 洗板系统 酶标板读数仪 自动装载传递系统 FAME STAR 全自动酶免系统使用注意事项 所有手工操作中的注意事项 尽量使用一次性的加样Tip头，避免交叉污染。 定期更换试剂，保证试剂槽的清洁。 仪器定期的维护保养与校正。 自动化检测系统实习内容 检测原理 仪器的基本结构 仪器基本操作 检测项目的临床应用 仪器的管理（维护和保养、校准、验证等） 质量控制 免疫检验自动化是将免疫检验过程中的取样、加试剂、混合、温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报告和仪器清洗等步骤由计算机控制，仪器自动化进行。 定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原，在抗原抗体反应的第一阶段，溶液中产生的散射光信号波动大，所获取的信号不稳定，定时散射比浊法避开这一阶段，专门测定抗原抗体反应