斜纹夜蛾核型多角体病毒单克隆抗体的制备、研究和应用.pdfVIP

n67上44 斜纹夜蛾核型多角体病毒单克隆抗体的耕氰分析和应用 摘要 litura 斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera 是一种有前途的生物杀虫剂。为了研究它的复制机制，建立灵敏高效的病毒检 测技术，本文制备了它的单克隆抗体。用蔗糖密度梯度离心纯化斜纹夜蛾SINPV 多角体，并从多角体中通过分子筛柱层析纯化SINPV病毒粒子。佣纯化的SINPV 病毒粒子免疫BAIZe小鼠，取脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，HAT 选择性培养液中筛选，经过3次连续克隆筛选，共得到了5株稳定分泌单克隆 抗体的杂交瘤细胞株～q， D。。C2。H12G，。D。E和A7】隗。用这些细胞株诱 和2．4x104。抗体亚型分析表明，单抗恕G。t籼域属于igGl类·单抗Hl矗属 于IgG曲类，单抗D。F|屑于lgG2．类，而单抗D。。巴属于IgG,类。抗原结构分析 发现，单抗A觑针对病毒蛋白的41KD多肽，f而其余四株单抗则针对31KD的 瓶毒多肽。胰蛋白酶酶解图谱分析显示，单抗如q特异地识别18KD的酶解片 的酶解片断。没有发现特异的酶解片断与单抗D。曩反应。7应用制备的单抗和多 抗比较了SINPV和棉铃虫核型多角体病毒(mNPV)，家蚕核型多角体病毒 和蓖麻蚕核型多角体病毒0cNPV)的血清学关系，发现除了单抗H12G，和AcNPV 有交叉反应外，其余单抗均不与这五种病毒反应。而多抗和五株NFV有不同的 交叉反应。利用单抗HI赫研究了AcNPV在sf细胞中的增殖动态及其对应抗 原多肽在感染过程中表达的规律。利用已制备的抗体。研究了SINPV在斜纹夜 蛾幼虫体内的增殖规律。 关键词： 斜纹夜娥核型多角体病毒。 杂交瘸。 单克隆抗体。增殖规律 The tnd of nmnodonai Preparation，characterizationapplication antibodies against Abstract that Five celllines secretmonoclonalantibodies litura hybridoma 89ianstSpodoptera WeIe monoclonalantibodiesweredeterminedto nucleopolyhedrovwusprepared．These tofourdifferentsubclassesof and Blot belong kG IgGl，IgG2．，IgG曲， IgG}Westem revealedthat／dab reactedwiththe41KDvnal the Ap6 analysis specific,ally peptide，while other reacted fourmonoclonalantibodieswiththe31KDviral peptide．Trypsin partial thatthese at demo