拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 郝昭程 等/拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达 115 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn January 25, 2015, 31(1): 115−122 DOI: 10.13345/j.cjb.140205 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 工业生物技术 拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达 郝昭程，王腾飞，李忠奎，郝梓凯，戴琨，王瑞明 250353 郝昭程, 王腾飞, 李忠奎, 等. 拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达. 生物工程学报, 2015, 31(1): 115–122. Hao ZC, Wang TF, Li ZK, et al. Expression of Arabidopsis thaliana thioesterase gene in Pichia pastoris . Chin J Biotech, 2015, 31(1): 115–122. 摘 要: 硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链，对中链脂肪酸 (Medium chain fatty acids ，MCFAs) 的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌，以拟南芥cDNA 为模 板，PCR 扩增得到其脂酰-ACP 硫酯酶基因 AtFatA ，经EcoR Ⅰ/Xba Ⅰ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中， 获得重组质粒pPICZαA-AtFat 。将重组质粒电击转入毕赤酵母GS115 中，通过Zeocin 抗性筛选，挑选出阳性 克隆子并摇瓶发酵诱导，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带，首次成功构建AtFatA 的真菌 表达系统。气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸，发现毕赤酵母AtFatA 重组菌株比起始GS115 菌株胞外 游离MCFAs (主要是辛酸) 产量增加 51% ，MCFAs 产量占胞外总脂肪酸产量的 28.7% ，而野生菌中这一比例 仅有 18.1%，这为日后生产安全无毒害的MCFAs 探索了一条新的途径。 : 拟南芥，脂酰-ACP 硫酯酶，毕赤酵母，基因重组表达，游离中链脂肪酸，胞外 Expression of Arabidopsis thaliana thioesterase gene in Pichia pastoris Zhaocheng Hao, Tengfei Wang, Zhongkui Li, Zikai Hao, Kun Dai, and Ruiming Wang Department of Food and Biology Engineering, Qilu University of Technology, Jinan 250353, Shandong, China Abstract: Thioesterase catalyzes the hydrolysis of acyl-ACP and saturated fatty acyl chain. It plays a key role in the accumulation of medium chain fatty acids in vivo. In this study, to construct an engineering strain to produce MCFAs, the Arabidopsis acyl-ACP thioesterase gene AtFatA was amplified by PCR from cDNA of arabidopsis and double digeste