大鼠背根神经节源干细胞分离培养和鉴定.pdfVIP

交通医学 2008年第 22卷第 5期 MedJofCommunicationS．2008。Vo1．22．No．5 ·45卜 [文章编号]1006—2440(2008)05-0451-04 · 论著与基础研究 · 大鼠背根神经节源干细胞分离培养和鉴定 顾 芸 丁 斐 顾晓松 (南通大学神经再生重点实验室，江苏226001) 摘 要 目的：探讨大 鼠背根节 (DRG)内是否存在神经干细胞。方法：取胚胎大 鼠DRG进行原代细胞培养 ， 观察其增殖与分化情况，并行P75BrdU／Nestin，GFAP，NF200免疫荧光组织化学鉴定。结果：细胞培养获得大量能 够分裂增殖且呈巢状悬浮生长的干细胞团，呈 P75BrdU／Nestin免疫荧光组织化学阳性反应；培养第三代细胞加入 胎牛血清 10d后，相差显微镜下可见部分细胞伸出多个细长突起 ，且免疫组化呈NF200阳性 ；部分细胞具有扁平 多突起的或双极细胞形态，免疫组化呈 GFAP染色阳性。细胞球经NGF培养诱导 1d左右有些神经元样的细胞开 始迁 出，随着时间增长迁 出的细胞越来越多，并且细胞和细胞之间发生联系，形成交错的复杂网络 ，迁出的细胞经 免疫组化鉴定几乎都是呈NF200免疫染色阳性。结论：大 鼠DRG内存在有神经干细胞，这些细胞可以分化为神经 元和神经胶质细胞。 关键词 胚胎大鼠；背根节；细胞培养；神经干细胞 中图分类号 Q813．11 文献标识码 A Cultureandidentificationofneuralstem cellsfrom ratdorsalganglia GUYun，DINGFei，GuXiaosong(JiangsuKeyLaboratoryofNeuroregeneration，NantongUniversity，Jiangsu226001) Abstract Objective：Toinvestigatewhetherthereexistneuralstemcellsinratdorsalganglia(DRG)．Method：Cellsisolatedfrom fetalratDRGwererespectivelyculturedandobservedintheirprolfierationanddifferentiation．Thecellularmultiplicationwasobserved byimmun0cyt0chemicalfluoreseenwiht nestinandco—labelwithBrdu．Th edifferentiatedcellsweredetectedwiht neurofilamentprotein 200(NF200)andGlialFibrillaryAcidicProtein(GFAP)immunoeytochemicalfluorescentstainingrespectively．Result：Nest—likeclusters ofneuralstem cellswereobtainedinsuspensionandthecellscoulddevideorprolfieratenadshowedNestin／Brdupositive．Someofhte htirdpassagedcellsprotrudedseveral elongateprocessesandexpressedtheNF200inthepresenceoffeatlbovineseurm，whilesome cellswereflatordipolarandlabledwiht GFAP．Th ere weresomecellsmigratedfrom hteneurosphereafteraddingNGFtwodayslater， andthetimewaslonger，htecellsweremore，htosecellscontactedwiht eachotherna dform acomplicatednet，a