肝源性磷脂酰胆碱对肝细胞酒精性损伤的保护作用.pdfVIP

· 398 · · 临床与基础研究 · 肝源性磷脂酰胆碱对肝细胞酒精性损伤的保护作用 于拈 张媛 贾丹 崔玉影 赵春晖 邹伟 酒精性肝病 (AID)是世界范围内备受关注 的肝病之一。 (四)肝 PC含量测定 按照试剂盒说明书测定。 目前对酒精性肝病的治疗 ，除解酒 、对症治疗外 ，尚缺乏特效药 (五)急性酒精肝损伤肝细胞模型建立与肝 PC预先保护 物l_ 。磷脂酰胆碱 (PC)又称卵磷脂 ，是动物细胞膜 的重要组 实验 浓度为 5x10个 ／ml的对数生 长期细胞接种于 96孔 分之 一，具有广泛 的生理活性，如降血脂、防止动脉硬化、促进 板 ，200}￡l／孔。培养24h。100mmol／I浓度的无水乙醇作用 大腑活动 、延缓衰老、增强学 习和记忆力等[。 目前 ，国内外对 张氏肝细胞 9h，即酒精肝损伤模 型。细胞换液 时将肝 PC，加 卵磷脂的研究与开发多集中于大豆和蛋黄。有研究表明，大豆 入新鲜培养基 中，按不 同剂量 (12．5～ 100nmol／I)，预作用 PC对肝细胞损伤具有一定的保护作用 。但对于含量丰富的动 12h，或用 50nmol／I肝 PC分别作用 0、6、12、24、48h，20 “1／ 物肝脏卯磷脂研究鲜见报道 。我们以往的研究表明，动物肝脏 孔 。之后加入 100mmol／I无水 乙醇 5．7 1／-~k， 肝 PC继续 中不饱和脂肪酸含量明 高于其他组织，存在特异的卵磷脂合 共同作用 9h。作用完毕后收集培养基 清和细胞用于指标检 成途径 ，含有植物源卵磷脂 中所没有 的功能分子 ，对肝癌细胞 测 。每个剂董组与时间组3个平行，并设置_F常对照组和酒精 的增殖起抑制作用 。。同时动物来源 的卯磷脂血溶性好 ，易 损伤组 。 于人体吸收 ，且有效含量高于大豆磷脂 。此外有研究表明，肝 (六)各项指标测定 释放到 七清 的AST反映肝细胞受损 细胞损伤时细胞膜的PC代谢和含量会发生 日』】显的变化。本 程度 ，细胞 MDA水平反映脂质过氧化程度 ，(；sH水平反映内 实验 以E常人盯细胞作为研究对象，在建立肝细胞损伤模型基 源抗氧化能力的大小，T(j含量反映脂肪酸氧化程度一上清指 础 E，观察肝 PC对酒精性肝损伤的保护作用。 标的测定 ：酶动力学法测定 AST，具体步骤按试剂盒说 明书操 作 。细胞指标测定：1 Tritomx100裂解细胞 ，硫代 巴比妥酸 材料与方法 比色法测定 MDA；酶 比色法测定 FG；DNTB 比色 法测定 一 、 材料 GSH；具体步骤按试剂盒说明书操作。Lowry法进行蛋 白定 新鲜猪肝 (大连础明集 团提供)，张 氏肝细胞 (购于 中国科 量 。 学院 卜海细胞库)，PC标准品 (Sigma公司，美 国)，磷脂试剂盒 三 、统计学处理 (中乍北控 物科技公司)，甘油三脂(TG)试剂盒 (浙江东欧生 用 SPSS／0．0统计分析软件进行数据处理，各组间的比较 物 程有限公司)，大冬氨酸氨基转移酶 (AST)试剂盒 、丙二醛 用单因素方差分析。P()．05为差异有统汁学意义。 (MDA)试剂盒 、还原型谷胱甘肽 (GSH)试剂盒 、超氧化物岐化 结 果 酶 (SOD)试剂盒(均为南京建成生物工程研究所产 品)，其他试 剂均为国产分析纯。 一 、 肝 PC的鉴定 二 、方法